3討論
PED一直是困擾養(yǎng)豬業(yè)的一大問(wèn)題，盡管疫苗免疫是防控PEDV感染的有效措施，但隨著PEDV變異株的出現(xiàn)，經(jīng)典PEDV毒株的疫苗根本無(wú)法控制新毒株的致病性。同時(shí)臨床上尚無(wú)治療PEDV感染的特效藥，但現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有效的抗病毒藥物可以在預(yù)防性治療中發(fā)揮重要作用，因此，臨床上迫切需要開(kāi)發(fā)抗PEDV藥物?；仡櫸墨I(xiàn)可知，PEDV吸附和侵入靶細(xì)胞的時(shí)間為30～60 min，PEDV侵入細(xì)胞完成一個(gè)生命周期大約需要6 h。已有研究者針對(duì)病毒感染過(guò)程中的各個(gè)階段篩選或設(shè)計(jì)了新型抗病毒藥物。例如，槲皮素(quercetin)可以通過(guò)抑制PEDV 3C樣蛋白酶(3C-like protease，3CLpro)的活性來(lái)抑制PEDV在Vero細(xì)胞中的復(fù)制，甘草中的甘草甜素(glycyrrhizin，GLY)提取物可以通過(guò)依賴HMGB1/TLR4-MAPK p38途徑來(lái)阻止高遷移率族蛋白B1(HMGB1)與Toll樣受體4(Toll-like receptor 4，TLR4)的結(jié)合，從而抑制PEDV的感染。金雞寧(cinchonine)可以對(duì)PEDV生命周期的早期階段表現(xiàn)出顯著的抗病毒活性，醉魚(yú)草皂苷(buddlejasaponin)IVb主要抑制PEDV的復(fù)制和釋放階段，表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(epigallocatechin-3-Gallate)可以抑制PEDV吸附、入侵和復(fù)制等生命環(huán)節(jié)，Griffithsin通過(guò)抑制PEDV的吸附來(lái)抑制病毒的感染，番茄堿(tomatidine)可通過(guò)靶向3CLpro并抑制其蛋白活性來(lái)減少PEDV的復(fù)制。在本研究中，作者發(fā)現(xiàn)SLM以劑量依賴的方式顯著抑制PEDV的復(fù)制，基于病毒生命周期篩選抗病毒藥物，為其后期抗病毒機(jī)制的研究奠定了基礎(chǔ)。
藥物對(duì)病毒的抑制作用不僅與藥物作用機(jī)制有關(guān)，還與病毒增殖特性有關(guān)。SLM對(duì)甲型和乙型流感病毒表現(xiàn)出一致的抑制作用，其主要作用于流感病毒生命周期的早期階段，在流感病毒侵入過(guò)程中限制了病毒核蛋白(NP)的核遷移，進(jìn)而破壞內(nèi)體酸化。同時(shí)SLM能夠阻斷病毒基質(zhì)蛋白2(M2)的質(zhì)子通道活性，因此，SLM可以通過(guò)影響流感病毒脫殼的關(guān)鍵步驟進(jìn)而抑制病毒增殖。PEDV與流感病毒同屬于RNA病毒，其復(fù)制過(guò)程相似，SLM是否也通過(guò)該機(jī)制抑制PEDV增殖還有待探究。Wnt/β-catenin信號(hào)通路屬于Wnt經(jīng)典信號(hào)通路，該通路在細(xì)胞遷移、遺傳穩(wěn)定性和凋亡中具有重要作用。據(jù)報(bào)道，多種病毒在感染宿主細(xì)胞后均可激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，使β-catenin的含量增加，進(jìn)而影響病毒的增殖。Zhu等發(fā)現(xiàn)，當(dāng)β-catenin的含量受到抑制后，可降低牛皰疹Ⅰ型病毒(BoHV-1)的增殖。左葉雯研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)β-catenin表達(dá)量增加后，進(jìn)而抑制N蛋白的表達(dá)發(fā)揮抗PEDV的作用。SLM是Wnt/β-catenin信號(hào)傳導(dǎo)的有效抑制劑，可以通過(guò)阻斷Wnt/β-catenin通路抑制腫瘤的生長(zhǎng)，因此，SLM可能通過(guò)調(diào)控β-catenin發(fā)揮抗病毒作用。
PEDV屬于冠狀病毒科、冠狀病毒屬，目前治療冠狀病毒感染的藥物主要包括廣譜抗病毒藥、靶向病毒核酸的抗病毒藥和靶向病毒關(guān)鍵復(fù)制酶的抗病毒藥等。聚醚離子載體屬于廣譜抗病毒藥，據(jù)報(bào)道，其對(duì)人體免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1，HIV-1)、流感病毒(influenza virus，IV)、寨卡病毒(Zika virus，ZV)和嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)具有抗病毒活性。SLM是一種聚醚離子載體類(lèi)的廣譜抗生素，已經(jīng)是歐洲食品和藥品管理局(EFSA和EMEA)批準(zhǔn)用于動(dòng)物飼料的藥物，在正常的喂養(yǎng)劑量下，SLM不會(huì)在動(dòng)物中引起明顯的異常，在動(dòng)物的治療水平上通常是安全有效的。SLM常用于動(dòng)物飼料中，以預(yù)防球蟲(chóng)病，提高家禽和牛的飼料效率，還可作為仔豬、育肥豬的新一代離子型促生長(zhǎng)劑，其作用機(jī)制主要是通過(guò)干擾有害微生物，進(jìn)而改善飼料轉(zhuǎn)化率，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，SLM對(duì)動(dòng)物機(jī)體來(lái)說(shuō)是相對(duì)安全的，嚴(yán)格控制其用量即可發(fā)揮預(yù)防疾病的作用，方便臨床應(yīng)用。與開(kāi)發(fā)新的抗病毒治療化合物相比，藥物再利用是一種有價(jià)值的戰(zhàn)略，因?yàn)槠涑杀靖停瑢徟鷷r(shí)間更快。因此，選取SLM作為PEDV的治療藥物進(jìn)行研究大大縮短了新藥研發(fā)周期，節(jié)省了人力、物力、財(cái)力。
本研究以PEDV感染Vero細(xì)胞為體外模型，在病毒生命周期的吸附、入侵、復(fù)制和釋放四個(gè)不同階段添加SLM，發(fā)現(xiàn)SLM顯著抑制PEDV在Vero細(xì)胞中復(fù)制的過(guò)程，而對(duì)病毒吸附、入侵和釋放階段沒(méi)有顯著的影響。此外，SLM體外抑制PEDV復(fù)制的機(jī)制和SLM在體內(nèi)的抗PEDV效果需進(jìn)一步探討。本研究結(jié)果為PEDV的防治提供新的策略。
4結(jié)論
SLM以劑量依賴的方式顯著抑制PEDV在Vero細(xì)胞上的增殖，并且其主要作用于PEDV的復(fù)制階段，而對(duì)PEDV的吸附、入侵和釋放階段沒(méi)有顯著影響。
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