人類呼吸道樣本采集
鼻咽拭子
1)受試者采樣前1h內(nèi)禁止進(jìn)食和飲水。
2)口咽部樣本采集選擇頭口連接處到扁桃體柱頭間的區(qū)域。
3)左右鼻咽樣本采集方式為拭子穿過鼻孔后擦拭。
4)口咽部麻醉后用滅菌棉拭子在受試者口/鼻咽采集部位旋轉(zhuǎn)1周，在取樣時避免觸及舌、口頰黏膜和唾液、鼻腔等非采集部位。
5)取樣后將棉拭子頭（2-3個）剪下放入滅菌凍存管，液氮速凍，-80℃保存，干冰寄送。
痰液
1)自行咳痰采集：晨痰為佳，用冷水漱口，深吸氣后用力咳出呼吸道深部痰液。
2)吸痰器吸引采集：醫(yī)護(hù)人員協(xié)助患者取適當(dāng)體位，自下而上叩擊患者背部，然后將吸引器及可控吸痰杯連接，抽吸痰液于無菌痰液采集容器中。
3)氣管鏡采集：聯(lián)系內(nèi)窺鏡室，協(xié)助醫(yī)生在氣管鏡引導(dǎo)下，直接采集標(biāo)本。
4)使用收集管收集：使用收集管插入患者的氣管中以獲取痰液樣本。
5)誘導(dǎo)咳痰采集：對咳痰困難者，先用濕牙刷清潔口腔粘膜、牙齦和舌，無菌水或生理鹽水漱口，然后使用噴霧器吸入4mL 7%高滲鹽水后，30min內(nèi)收集誘導(dǎo)痰液至無菌容器里。
6)小兒取痰：用彎壓舌板向后壓舌，將棉拭子伸入咽部，小兒受到刺激噴出肺部或氣管分泌物粘貼在拭子上。
※注意：
a.以晨痰為好，多數(shù)病人清晨痰較多，易于采集。
b.最好在抗菌藥物之前或者抗菌藥物停藥一周后采集。
c.可使用無菌鹽水(60mL)作為漱口水，以減少口腔微生物的污染。
d.呼吸道傳染病患者痰液拒接，客戶需自行提取DNA后送樣。
氣管
1)樣本采集前使用生理鹽水沖洗支氣管鏡管道。
2)受試者使用生理鹽水漱口90s。
3)口咽噴霧麻醉后前端帶有無菌棉簽的支氣管鏡經(jīng)口插入直達(dá)聲門處取樣（已經(jīng)實施局部麻醉，并可見呼吸道分泌物）。
4)支氣管鏡取樣后將棉拭子頭（2-3個）剪下放入滅菌凍存管，同時生理鹽水沖洗支氣管鏡管道。
5)棉拭子頭和生理鹽水沖洗液為采集到的樣本，液氮速凍，-80℃保存，干冰寄送。
04
支氣管肺泡灌洗液（BALF）
1)采集前準(zhǔn)備：無菌生理鹽水沖洗所使用器材支氣管鏡按照手術(shù)需求進(jìn)行局部麻醉。
2)采集：經(jīng)操作孔道注入適量無菌生理鹽水（總量一般60-120mL，分次注入）負(fù)壓吸引收集灌洗液，測微生物菌群建議體積量為50mL左右，盡量多，收集至無菌離心管/容器中。
3)樣本處理：為去除部分組織碎片，可采取無菌濾膜（孔徑：10μm左右）過濾，微生物樣本收集，可通過繼續(xù)過濾（孔徑0.22μm濾膜），獲取的濾膜需要放入凍存管中液氮速凍（若體積過大，可用無菌簡單剪碎后放置）；也可使用離心法富集沉淀，液氮速凍。
4)寄送保存：液氮速凍樣本后干冰運(yùn)輸，樣本保存于-80℃冰箱。
※注意：不同病人的肺部微生物含量不一，可能有些病人灌洗下來的微生物量非常少，提取獲得的DNA量也會很少，因此前期采樣建議用大量的灌洗液灌洗，洗脫足夠多的微生物。
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