2結(jié)果與分析
2.1樣品形態(tài)學(xué)鑒定
樣品子實(shí)體菌落形態(tài)如圖1、2所示。頭部呈橢圓形或卵圓形或近球形，飽滿肥厚，呈顆粒狀簇生在一起，表皮黑褐色、光滑，內(nèi)部呈白色，有濃郁的香氣。菌絲體呈樹枝狀，由根部往上生長(zhǎng)分出若干分枝。菌絲體表皮呈黑褐色，帶黑色斑點(diǎn)，末端白色，在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)分泌出水滴狀液體。
2.2野生菌株的ITS序列分析
PCR產(chǎn)物經(jīng)0.8%瓊脂糖凝膠電泳分析顯示，可見約600 bp的目的條帶，條帶明亮清晰，無拖尾，見圖3。測(cè)序獲得野生菌株的ITS區(qū)域核酸序列，共579 bp。提交至GenBank獲得基因號(hào)為KF897015。下載與其同源性較高的菌株序列作為參考，用Mega 5.1軟件構(gòu)建分子系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果如圖4所示。與登錄號(hào)為FM164944.1的多形炭角菌（Xylaria polymorpha）的DNA序列同源性為99%。結(jié)合形態(tài)特征鑒定結(jié)果，鑒定該菌為多形炭角菌（Xylaria polymorpha），屬于炭角菌目，炭角菌科，炭角菌屬。
圖4 T-18的16 s基因序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹
2.3不同碳源對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響
不同碳源對(duì)多形炭角菌菌絲體生物量影響如圖5所示。該菌株在5種供試碳源中均可生長(zhǎng)，表明該菌株菌絲對(duì)單糖、雙糖及多糖均能利用，但菌絲長(zhǎng)速和長(zhǎng)勢(shì)存在差異。該菌株以葡萄糖作為碳源時(shí)菌絲生物量最大，達(dá)到466 mg/100 mL，且與其他碳源相比，差異顯著（P＜0.01）。因此，葡萄糖為菌絲生長(zhǎng)的最佳碳源。
圖5不同碳源對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響
2.4不同氮源對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響
不同氮源對(duì)多形炭角菌菌絲體生物量影響如圖6所示。結(jié)果表明，多形炭角菌菌絲體在6種供試氮源培養(yǎng)基中均能生長(zhǎng)，但不同氮源對(duì)菌絲體生物量的影響有差異，其中以牛肉膏為氮源的菌絲體生物量最高，達(dá)到327 mg/100 mL。無機(jī)氮源中，除硫酸銨組外，供試氮源與空白對(duì)照菌絲體生物量差異均顯著（P＜0.05），但沒有達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）。
圖6不同氮源對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響
2.5不同無機(jī)鹽對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響
不同無機(jī)鹽對(duì)多形炭角菌菌絲體生物量影響如圖7所示。結(jié)果表明，其中以KH2PO4和MgSO4為無機(jī)鹽的菌絲體生物量較大，分別達(dá)到351 mg/100 mL和346 mg/100 mL，而以硫酸鋅為無機(jī)鹽的菌絲體生物量最少，只有32 mg/100 mL。
2.6不同pH對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響
不同pH對(duì)多形炭角菌菌絲體生物量影響如圖8所示。結(jié)果表明，多形炭角菌菌絲體在供試pH為4～9的培養(yǎng)基都能生長(zhǎng)。培養(yǎng)基在pH 7時(shí)菌絲體生物量最高，達(dá)到386 mg/100 mL，pH 3時(shí)菌絲體生物量最低，為169 mg/100 mL。培養(yǎng)基pH偏酸或偏堿時(shí)，都不適宜菌絲體生長(zhǎng)。因此可將pH 7選為多形炭角菌菌絲體液體發(fā)酵培養(yǎng)的最適pH。
圖7不同無機(jī)鹽對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響
圖8不同pH對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響
2.7不同溫度對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響
不同溫度對(duì)多形炭角菌菌絲體生物量影響如圖9所示。培養(yǎng)溫度15～25℃，隨著溫度的上升，菌絲生長(zhǎng)速度加快，于25℃時(shí)菌絲體生物量最高，達(dá)到424 mg/100 mL，與其他溫度相比均達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）。因此，最適培養(yǎng)溫度為25℃。
圖9不同溫度對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響
3小結(jié)與討論
天然藥用炭角菌資源非常稀少，子實(shí)體的人工栽培技術(shù)尚未成熟，利用現(xiàn)代生物技術(shù)進(jìn)行液體深層發(fā)酵，可以得到大量的菌絲體和代謝產(chǎn)物。探究多形炭角菌菌絲體液體發(fā)酵培養(yǎng)的最佳營養(yǎng)條件和最適環(huán)境條件，了解其生長(zhǎng)特性，提高菌絲體產(chǎn)量，對(duì)炭角菌研究具有重要意義。多形炭角菌液體培養(yǎng)最佳碳源為葡萄糖，結(jié)果與欒洋等的報(bào)道類似。炭角菌不僅能通過滲透作用直接吸收單糖，而且能分泌淀粉酶等胞外酶，將淀粉等分解成葡萄糖后吸收。菌絲體能有效利用有機(jī)氮，而幾乎不能利用無機(jī)氮源。分析原因可能是由于有機(jī)氮除提供氮源外，還提供一定的碳素營養(yǎng)和生長(zhǎng)因子，從而促使?fàn)I養(yǎng)平衡和物質(zhì)轉(zhuǎn)化。供試無機(jī)鹽中磷酸二氫鉀、硫酸鎂對(duì)菌絲體生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用，K、Mg、P是多形炭角菌生長(zhǎng)必需的大量元素。
野生菌株T-18屬于多形炭角菌（Xylaria polymorpha），菌絲生長(zhǎng)的最適溫度為25℃，最適pH為7.0，最適碳、氮源分別為葡萄糖和牛肉膏，添加一定量的MgSO4和KH2PO4有利于菌絲體的生長(zhǎng)。
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