本研究通過建立紫外線誘導(dǎo)酵母菌細(xì)胞氧化損傷模型，研究沒食子酸對酵母細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用，先通過繪制酵母菌的生長曲線，確定了酵母菌細(xì)胞的4個(gè)生長階段，確定酵母菌細(xì)胞培養(yǎng)5 h進(jìn)入生長對數(shù)期。此外，50μg·mL-1沒食子酸溶液預(yù)處理對紫外氧化損傷酵母細(xì)胞具有明顯的保護(hù)作用，為沒食子酸作為抗氧化劑的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。
實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作
（1）酵母菌活化。在無菌條件下，將1%酵母粉末加入滅菌后的5%葡萄糖溶液中。置于28℃搖床中振蕩培養(yǎng)（轉(zhuǎn)速200 r·min-1）活化3 h。
（2）酵母菌的YEPD液體培養(yǎng)。按1%比例將酵母菌液轉(zhuǎn)移到新培養(yǎng)基中，置于28℃搖床振蕩培養(yǎng)（轉(zhuǎn)速200 r·min-1）5 h，將酵母培養(yǎng)至對數(shù)期，可冷藏保存。
（3）酵母菌的生長曲線。從搖晃均勻后的酵母菌YEPD液體培養(yǎng)基中無菌取出菌液，加入到滅菌過的新鮮YEPD液體培養(yǎng)基中，每間隔2 h測定吸光度數(shù)值，最終測得24 h的吸光度，用稀釋后的混合液吸光度乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)得吸光度數(shù)值。以接種后0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、14 h、16 h、18 h、20 h、22 h和24 h為橫坐標(biāo)，以吸光度乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)為縱坐標(biāo)，最終繪制出酵母細(xì)胞24 h的生長曲線。
結(jié)果
單細(xì)胞微生物的生長過程通常分為4個(gè)階段，即適應(yīng)期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期。由圖1知，酵母菌的生長曲線清晰地反映了酵母菌的4個(gè)生長階段，初始階段0～5 h為酵母菌生長的遲滯期；5～14 h的生長曲線呈大幅上升趨勢，酵母菌經(jīng)過短暫的適應(yīng)期后快速生長，開始大量繁殖，發(fā)酵速度明顯加快，菌種數(shù)量增多，說明酵母菌進(jìn)入了生長對數(shù)期；14～22 h產(chǎn)生大量的次生代謝產(chǎn)物使得pH值下降，酵母菌生長環(huán)境惡劣，此時(shí)生長速度下降，酵母細(xì)胞的對數(shù)生長階段結(jié)束進(jìn)入穩(wěn)定生長階段，活菌數(shù)目變化不大，培養(yǎng)22 h后酵母菌的數(shù)量達(dá)到峰值。22 h以后，酵母菌的生長呈緩慢的下降趨勢，是酵母菌生長的衰亡期。
圖1酵母菌的生長曲線
綜上可知，此高活性酵母的對數(shù)期在5～14 h。在酵母細(xì)胞穩(wěn)定期，酵母細(xì)胞的生長速率和死亡速率達(dá)到基本平衡，此時(shí)酵母細(xì)胞的總體個(gè)數(shù)保持基本不變，所以不適合測定。而在對數(shù)生長期酵母的生長速率遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于死亡速率，以最快速度進(jìn)行繁殖，此時(shí)的酵母菌細(xì)胞活性旺盛，細(xì)胞個(gè)體形態(tài)及生理指標(biāo)都較為穩(wěn)定，所以本實(shí)驗(yàn)選取酵母為對數(shù)期酵母。
相關(guān)新聞推薦
1、微生物生長曲線繪制，Bioscreen可以取代這兩個(gè)傳統(tǒng)組合儀器
2、大尺度環(huán)境樣本土壤活體微生物研究方法評估與驗(yàn)證（五）
3、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌烈性噬菌體分離鑒定、生長曲線及應(yīng)用潛力——材料與方法