研究簡介
益生菌能夠利用生物活性化合物增殖，其復合物的免疫功能比單一的益生菌更強。然而，很少有研究調(diào)查這些復合物增強免疫功能的潛力。本研究以從西藏傳統(tǒng)發(fā)酵乳制品中分離的副干酪乳桿菌JY091（L.paracasei JY091）和蜂王漿為研究對象。通過體外生長粘附試驗、體外細胞試驗、體內(nèi)小鼠試驗和腸道菌群分析對副干酪乳桿菌JY091與蜂王漿（LR）的復合物進行評價。當5%蜂王漿體外培養(yǎng)時，副干酪乳桿菌JY091的活菌計數(shù)最高。LR可緩解脂多糖誘導的Caco-2細胞炎癥，高劑量組（109 CFU/mL副干酪乳桿菌JY091+5%蜂王漿）可顯著減輕脂多糖誘導的炎癥。
LR可以提高免疫功能低下小鼠的免疫力。對于CTX誘導的免疫功能低下小鼠，高劑量組顯著增加免疫球蛋白和促炎因子（IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ）含量，顯著降低抗炎因子（IL-10）含量，并在一定程度上恢復受損的脾臟組織結構和紅白髓分布，調(diào)節(jié)T淋巴細胞總水平和亞組間比例平衡。LR可以調(diào)節(jié)腸道菌群的多樣性。灌胃后，Alpha多樣性指數(shù)增加，有害菌（瘤胃球菌屬、變形菌門屬、阿德勒克柔氏菌屬和丹毒菌科）豐度降低。有益細菌（Coprococcus、雙歧桿菌、乳桿菌、糞桿菌、Alistipes、Oscillospira和Roseburia）的豐度增加。結果表明，蜂王漿可作為副干酪乳桿菌JY091的潛在益生元。研究結果為復合功能食品的發(fā)展提供了新的見解和理論基礎。
Bioscreen全自動生長曲線分析儀的應用
Bioscreen全自動生長曲線分析儀用于培養(yǎng)副干酪乳桿菌JY091，制備了分別含有1%、3%、5%、7%和9%蜂王漿的無葡萄糖MRS培養(yǎng)基。將副干酪乳桿菌JY091以5%的接種量接種到這些培養(yǎng)基中。采用Bioscreen Cpro自動生長曲線儀檢測不同培養(yǎng)基中菌株的生長情況。在穩(wěn)定的生長曲線下通過鋪展板法測量生長過程中的最大活細胞數(shù)量。研究人員可以實時監(jiān)測其在不同培養(yǎng)條件下的生長情況。
實驗結果
本研究開發(fā)了副干酪乳桿菌JY091與蜂王漿的復合制劑，以增強免疫功能。研究表明，蜂王漿可促進副干酪乳桿菌JY091的生長并增強其粘附性能，濃度為5%可產(chǎn)生最明顯的有益效果。這些發(fā)現(xiàn)表明蜂王漿具有潛在的益生元特性。此外，結果表明副干酪乳桿菌JY091和蜂王漿復合物在體外和體內(nèi)有效調(diào)節(jié)促炎和抗炎介質(zhì)之間的平衡，從而恢復免疫功能。高劑量組在恢復受損的脾臟組織結構、紅髓和白髓分布比例、T淋巴細胞總水平和亞組比例、緩解脾損傷方面更有效。此外LR可以提高腸道菌群的多樣性，調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)的平衡，促進一些有益菌的生長，抑制一些有害菌的生長?？傊?，LR恢復了免疫功能低下小鼠的免疫功能。
圖1、（a）不同蜂王漿濃度下副干酪乳桿菌JY091的生長曲線，（b）不同蜂王漿濃度對副干酪乳桿菌JY091黏附率的影響。??表明不使用蜂王漿組與使用蜂王漿組比較，差異有統(tǒng)計學意義。副干酪乳桿菌JY091的生長曲線表明，在含有不同濃度蜂王漿的培養(yǎng)基中培養(yǎng)時，活菌數(shù)量存在顯著差異。隨著蜂王漿的添加量從1%增加到3%，副干酪乳桿菌JY091達到對數(shù)期所需的時間越來越長，細菌生長越來越好，培養(yǎng)基中活菌數(shù)量增加。當蜂王漿的添加量達到5%時，活菌數(shù)量最多。
圖 2、副干酪左桿菌 JY091 和蜂王漿作用于 Caco-2 細胞后炎癥因子基因的表達。??表明模型組與模型組之間比較，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.01）。??表明不同模型組間差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.01）。?表明不同模型組間差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。
圖3.小鼠脾臟的HE染色。黃色箭頭代表中性粒細胞浸潤。紅色箭頭代表多核巨噬細胞，放大倍數(shù)為200倍
圖 4、（a） 副干酪乳桿菌 JY091 和蜂王漿對小鼠脾臟 T 淋巴細胞亞群 CD3+ 的影響，（b） 副干酪乳桿菌 JY091 和蜂王漿對小鼠脾臟 T 淋巴細胞亞群 CD4+ 的影響，（c） 副干酪乳桿菌 JY091 和蜂王漿對小鼠脾臟 T 淋巴細胞亞群 CD8+ 的影響。放大倍數(shù)為 200 倍。??表明不同模型組間差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.01）。?表明不同模型組間差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。## 表明正常組與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.01）。# 表明正常組與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。
圖5、副干酪乳桿菌JY091和蜂王漿對小鼠脾細胞炎癥因子基因表達的影響。與NC組相比，IM組促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ的mRNA表達顯著降低，抗炎因子IL-10的mRNA表達顯著升高（P<0.01）。與IM組相比，L、M、H、S、R組均能增加促炎因子的mRNA表達，并不同程度地抑制抗炎因子的mRNA表達，其中M、H、S組效果顯著（P<0.01）。LR可以通過調(diào)節(jié)體內(nèi)和體外細胞因子的表達水平來促進機體產(chǎn)生免疫反應，從而促進免疫反應。
總結
本研究旨在探討副干酪乳桿菌JY091與蜂王漿復合物對機體免疫調(diào)節(jié)作用及腸道菌群的影響。免疫系統(tǒng)是維持機體健康的關鍵防線，而腸道菌群與免疫系統(tǒng)之間存在著密切的相互作用。近年來，益生菌和天然產(chǎn)物在免疫調(diào)節(jié)和腸道健康領域的研究備受關注。副干酪乳桿菌作為一種益生菌，具有調(diào)節(jié)腸道菌群、增強免疫功能等多種潛在益處。蜂王漿則富含多種生物活性成分，如蛋白質(zhì)、肽類、維生素等，被認為具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化等功效。將兩者復合使用，可能會產(chǎn)生協(xié)同作用，從而更有效地改善機體的免疫狀態(tài)和腸道微生態(tài)。采用了體外細胞實驗和體內(nèi)動物實驗相結合的方式。首先，通過體外細胞培養(yǎng)實驗，觀察副干酪乳桿菌JY091與蜂王漿復合物對免疫細胞（如巨噬細胞、T細胞等）的增殖、活化以及細胞因子分泌的影響。結果表明，該復合物能夠顯著促進免疫細胞的增殖和活化，并上調(diào)多種關鍵細胞因子的表達，如白細胞介素-2（IL-2）、干擾素-γ（IFN-γ）等，從而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。通過在Bioscreen全自動生長曲線分析儀培養(yǎng)副干酪乳桿菌JY091，研究人員可以實時監(jiān)測其在不同培養(yǎng)條件下的生長情況。在研究中，研究人員設置了多個實驗組和對照組，單獨培養(yǎng)副干酪乳桿菌JY091、添加蜂王漿的復合培養(yǎng)組以及空白對照組。Bioscreen設備能夠同時處理多個樣本，通過對比不同組別的生長曲線，研究人員可以直觀地觀察到蜂王漿對副干酪乳桿菌生長的促進或抑制作用。
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