1.10菌株HP-1降解有機(jī)磷農(nóng)藥降解譜的測定
為探討該菌株降解有機(jī)磷農(nóng)藥的降解譜，選取目前生產(chǎn)中常用的有機(jī)磷農(nóng)藥樂果、毒死蜱蜱、三唑磷、辛硫磷作為目標(biāo)農(nóng)藥，按照1.9的方法進(jìn)行試驗(yàn)，培養(yǎng)7d，取樣用GC氣相色譜測定細(xì)菌對目標(biāo)農(nóng)藥的降解率。
1.11菌株HP-1的發(fā)酵液的生物活性試驗(yàn)
取無農(nóng)藥培養(yǎng)液，將其稀釋100倍[100×]和200倍[200×]，將蘿卜種浸泡6~8 h，取出用清水沖洗后稍微涼干，然后放入含有保濕濾紙的培養(yǎng)皿中，每皿30粒，重復(fù)3次，于光照培養(yǎng)箱中28℃進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)，分別計(jì)算第2d和第3d的種子發(fā)芽率。以清水處理和培養(yǎng)基100倍[100×]、200倍[200×]處理作為對照。
2結(jié)果與討論
2.1菌種鑒定
2.1.1菌落形態(tài)特征
經(jīng)過反復(fù)富集培養(yǎng)和雙層平板夾心法純化分離，獲得純化菌株18株，然后利用甲胺磷農(nóng)藥作為唯一碳源進(jìn)行加壓選擇，選擇生長速度快、降解性能好的2個(gè)菌株作為目標(biāo)菌株，其編號為HP-1和HP-2。以HP-1進(jìn)行試驗(yàn)，革蘭氏染色陰性G-，PSB雙層平板培養(yǎng)上，培養(yǎng)7d，形成紅色的圓形菌落，邊緣整齊光滑，中間稍稍突起，菌落直徑0.64~2.60mm。
2.1.2菌體形態(tài)特征
掃描電子顯微鏡下觀察，細(xì)菌單個(gè)細(xì)胞短桿形或彎曲桿形，(0.40~0.70)μm×(1.2~2.0)μm（圖1）；生長有趨光性，不對稱出芽分裂（圖2）；細(xì)胞靠極生鞭毛運(yùn)動（圖3），有些或極少數(shù)細(xì)胞存在亞極生鞭毛。透視電子顯微鏡觀察切片，片層狀光合內(nèi)膜位于細(xì)胞膜下并與之平行（圖4），細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器濃縮成團(tuán)。
2.1.3菌株HP-1的培養(yǎng)特征
富集培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)液呈棕紅色。純化后在光照厭氧或微好氧條件下，培養(yǎng)液開始變渾濁，隨后培養(yǎng)液為淡紅色，對數(shù)生長期之后培養(yǎng)液變?yōu)轷r紅色或深紅色，培養(yǎng)時(shí)間過長，培養(yǎng)瓶底部可見菌體聚集成絮狀沉淀。
2.1.4菌株HP-1活細(xì)胞色素光譜吸收特性
菌株HP-1在有無農(nóng)藥處理的情況下，活細(xì)胞色素的吸收光譜特性明顯不同（如圖5和圖6所示）。在有無農(nóng)藥處理的情況下，二者在854、856、805 nm處理均有紅螺菌目葉綠素a的吸收峰，這與《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊第九版》所描述的相吻合。在388 nm處均有相同的吸收峰，但是在有農(nóng)藥加壓培養(yǎng)的情況下，在259~285nm之間活細(xì)胞的吸收峰值陡增，這與無農(nóng)藥處理的吸收峰完全相反，且無農(nóng)藥處理時(shí)吸收值比農(nóng)藥處理時(shí)明顯要低，該峰為類胡蘿卜素的吸收峰，說明用農(nóng)藥進(jìn)行加壓選擇，菌株能夠以農(nóng)藥作為唯一的碳源生長，且明顯優(yōu)于對照并大量生產(chǎn)類胡蘿卜素，從而在農(nóng)藥處理時(shí)使活細(xì)胞的吸收峰值發(fā)生改變。
2.1.5菌株HP-1的生理生化特性
光合細(xì)菌菌株HP-1能夠利用多種有機(jī)化合物作為碳源生長和電子供體進(jìn)行光照厭氧和微好氧生長。試驗(yàn)結(jié)果表明：菌株HP-1能夠利用乙酸鈉、丙酸鈉、谷氨酸鈉、甘露醇、葡萄糖、葡萄糖酸鈉、蛋白胨、酵母浸膏、丙酮酸鈉、檸檬酸三鈉、果糖作為唯一碳源生長良好，但是不能夠利用酒石酸鈉、蘋果酸、丙二酸鈉、苯甲酸鈉等碳源。其中丙酸鈉、葡萄糖、蛋白胨、酵母浸膏、檸檬酸三鈉、葡萄糖酸鈉，對HP-1菌株生長具有明顯的促進(jìn)作用。
表1碳源生長情況碳源生長情況
甲酸鈉-山梨醇-
乙酸鈉+++甘露醇+
丙酸鈉+++葡萄糖+++
酒石酸鈉-蛋白胨+++
蘋果酸-酵母浸膏++
谷氨酰胺++甘油-
丙酮酸鈉+++檸檬酸三鈉+++
丙二酸鈉-乙醇+
苯甲酸鈉-果糖+++
甲醇-葡萄糖酸鈉++
谷氨酸鈉++對照-
注："+++"生長良好，"++"生長好，"+"能夠生長，"-"不能生長
Notes:"+++"growing rapidly,"++"growing well,"+"growing,"-"no growing
2.1.6菌體DNA的G+C摩爾分?jǐn)?shù)的測定
按照熱變性溫度法，HP-1菌體的G+C摩爾分?jǐn)?shù)為65.70%。
2.2不同濃度的甲胺磷對菌株HP-1生長的影響
從培養(yǎng)的第2d開始取樣，測定菌液OD660nm的值，連續(xù)4次。菌株HP-1在含有不同濃度農(nóng)藥的PSB液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，可明顯觀察到低濃度農(nóng)藥的生長速度快于高濃度的生長速度，且62.5~1 000mg/L之間對菌體生長的抑制作用不十分明顯，但是當(dāng)濃度為2000mg/L和4000mg/L時(shí)，菌體生長明顯受到抑制，48h內(nèi)4000mg/L中菌體根本不生長；當(dāng)農(nóng)藥濃度過低（62.5mg/L），菌株生長速度相對較慢，可能是菌株生長的碳源供應(yīng)不足所致；而125~2000mg/L為最佳生長濃度，菌株的對數(shù)生長期為96h，隨著農(nóng)藥濃度的提高，其對數(shù)生長期出現(xiàn)稍稍后延的現(xiàn)象，由于過高農(nóng)藥濃度，其生長對數(shù)期所需時(shí)間明顯向后推移（圖7）。
相關(guān)新聞推薦
1、瘤內(nèi)微生物群對?腫瘤免疫治療效果與發(fā)展的影響