2結(jié)果與討論


2.1不同來源乳鐵蛋白樣品的蛋白質(zhì)含量


為防止不必問題，各公司樣品隨機(jī)編號(hào)為樣品1、樣品2、樣品3，測定各乳鐵蛋白樣品蛋白質(zhì)含量的結(jié)果，見表1。

表1不同乳鐵蛋白樣品的蛋白質(zhì)含量


2.2大腸桿菌菌密度-吸光值的標(biāo)準(zhǔn)曲線


按照1.2.2的方法，以大腸桿菌菌液吸光值（OD625）為橫坐標(biāo)，以菌落總數(shù)（cfu/mL）為縱坐標(biāo)，繪制出吸光值-大腸桿菌菌密度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖1。

圖1大腸桿菌菌密度-吸光值的標(biāo)準(zhǔn)曲線


由圖1可得曲線方程式是：y=7.37x+0.2676（R2=0.9987）。


2.3不同濃度的乳鐵蛋白對大腸桿菌的抑制作用


2.3.1不同的乳鐵蛋白樣品對大腸桿菌生長的抑制或促進(jìn)作用


選擇不同濃度的乳鐵蛋白分別添加到大腸桿菌的培養(yǎng)基中，考察不同濃度的乳鐵蛋白對大腸桿菌生長的抑制或促進(jìn)作用，結(jié)果見圖2。

圖2不同的乳鐵蛋白樣品對大腸桿菌生長的抑制作用


由圖2可見，在相同的濃度下，不同乳鐵蛋白樣品對培養(yǎng)中的大腸桿菌作用略有差異。有人認(rèn)為乳鐵蛋白的抗菌活性源于乳鐵蛋白螯合游離鐵離子的特性，使得微生物失去生長所需的鐵元素而被抑制；還有人指出乳鐵蛋白是通過氨基末端強(qiáng)陽離子結(jié)合區(qū)域作用于細(xì)菌細(xì)胞膜，增加其通透性而達(dá)到殺菌的作用。本實(shí)驗(yàn)中不同樣品間抑菌活性的差異，可能與各樣品的鐵飽和程度不同有關(guān)。


2.3.2不同濃度的乳鐵蛋白對大腸桿菌生長的抑制作用


不同濃度的乳鐵蛋白對大腸桿菌生長抑制作用的結(jié)果，見圖3。

圖3樣品1對大腸桿菌生長的抑制作用


培養(yǎng)0～7 h時(shí)，在對照組、2 mg/mL組、4 mg/mL組中大腸桿菌的菌密度迅速上升，最先達(dá)到穩(wěn)定期；在濃度為6、8、10 mg/mL的3個(gè)組的菌數(shù)則無明顯變化；在7 h～22 h內(nèi)，濃度為6、8、10 mg/mL 3個(gè)組的菌密度急速上升至穩(wěn)定期，并且蛋白濃度越大，上升的速率越快。培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，所有實(shí)驗(yàn)組的大腸桿菌菌液密度均大于對照組，并且添加的乳鐵蛋白濃度越大，最終的菌液濁度增幅度越大，與對照組差異顯著，結(jié)果見表2。

表2不同培養(yǎng)時(shí)間下樣品1對大腸桿菌生長影響的顯著性分析


高濃度的乳鐵蛋白在培養(yǎng)初期能顯著抑制大腸桿的生長，不論其抑菌機(jī)理如何，乳鐵蛋白的抑菌作用存在量效關(guān)系，由于E.coli處于對數(shù)增長，未被抑制的E.coli最終將呈現(xiàn)自身快速增長的特性。添加乳鐵蛋白的試驗(yàn)組，最終菌數(shù)高于空白組，說明乳鐵蛋白提供了促進(jìn)E.coli生長的營養(yǎng)要素。乳鐵蛋白的本質(zhì)是蛋白質(zhì)，可為微生物的生長提供C源和N源，可作為微生物生長的培養(yǎng)基。多數(shù)細(xì)菌，包括E.coli不能利用大分子蛋白質(zhì)，說明大分子蛋白質(zhì)乳鐵蛋白促進(jìn)E.coli生長的前提是分子的降解。在試驗(yàn)條件下，導(dǎo)致乳鐵蛋白降解的因素很可能是來自菌體裂解后釋放的酶類，而這種菌體的裂解是否由于菌體的自溶作用則需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。乳鐵蛋白分子被E.coli利用時(shí)已經(jīng)降解，降解的產(chǎn)物和降解的方式的深入研究，將有助于更深刻理解抗菌蛋白的作用。


2.4大腸桿菌污染程度對乳鐵蛋白抑菌性影響


隨著初始菌數(shù)的增加，乳鐵蛋白對大腸桿菌的最長抑菌時(shí)間縮短，見圖4。


可見，食品原料的初始污染程度顯著影響抗菌蛋白的抑菌效果；由于乳鐵蛋白在培養(yǎng)后期能促進(jìn)細(xì)菌生長，在食品的保藏中可能導(dǎo)致更嚴(yán)重的食品安全問題。這應(yīng)是食源性抗菌蛋白類防腐劑開發(fā)利用時(shí)，需要考慮的問題。如何與其他防腐劑復(fù)合處理改善抑菌效果將是很有益的研究。

圖4大腸桿菌污染程度對乳鐵蛋白抑菌性影響


3結(jié)論


乳鐵蛋白在較低濃度（≤4 mg/mL）下，能促進(jìn)E.coli生長，在較高濃度（≥6 mg/mL）時(shí)能表現(xiàn)出良好的抑菌作用；隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，不同濃度的乳鐵蛋白最終都能促進(jìn)E.coli生長，同時(shí)，菌數(shù)的增幅高于空白組。


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