制作活動(dòng)全口義齒和局部義齒最常用的材料是聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)。由于其良好的美觀效果、可承受的生產(chǎn)成本和制造簡(jiǎn)單性，這種材料得到了廣泛的應(yīng)用。當(dāng)患者忽視保持假牙清潔時(shí)，該區(qū)域通常會(huì)檢測(cè)到包括白色念珠菌和變形鏈球菌在內(nèi)的微生物。假牙口炎（DS）是一種真菌感染，在假牙使用者中發(fā)病率很高，是最常見的真菌感染之一。盡管DS可能涉及全身因素，但義齒表面上形成的微生物菌斑的鑒定是導(dǎo)致DS發(fā)生的關(guān)鍵因素。Citation6白色念珠菌與DS的發(fā)生以及其他因素（包括創(chuàng)傷、全身性疾病、假牙衛(wèi)生不良）有關(guān)。某些報(bào)告稱，變形鏈球菌會(huì)促進(jìn)白色念珠菌在假體上生長(zhǎng)，從而導(dǎo)致DS。因此預(yù)防DS的關(guān)鍵措施包括限制義齒菌斑內(nèi)微生物的增殖,必須仔細(xì)清潔假牙，以降低交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)并促進(jìn)最佳的口腔健康。對(duì)于機(jī)械清潔方式有困難的患者，建議使用化學(xué)義齒清潔劑來清潔義齒。人們普遍認(rèn)為變形鏈球菌是導(dǎo)致齲齒的一個(gè)重要因素，進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)后可能會(huì)導(dǎo)致亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎等全身性疾病，但AgBr-NP CTMAB的抗菌活性對(duì)變形鏈球菌生長(zhǎng)的具體影響仍然存在,變異病毒仍然未知。需要進(jìn)一步研究來闡明AgBr-NP CTMAB在促進(jìn)口腔健康方面的功能。本研究的目的是確定AgBr-NP CTMAB在抑制變形鏈球菌生長(zhǎng)和防止生物膜形成方面的功效，其次評(píng)估AgBr-NP CTMAB對(duì)表面硬度的影響PMMA與蒸餾水和Polident相比的、彎曲強(qiáng)度和粗糙度。
Bioscreen全自動(dòng)生長(zhǎng)曲線分析儀的應(yīng)用
將200μL 1×106 CFU/mL的細(xì)菌加入到自動(dòng)生長(zhǎng)曲線分析儀的平板中，設(shè)3個(gè)平行孔。使用Bioscreen全自動(dòng)生長(zhǎng)曲線分析儀監(jiān)測(cè)變形鏈球菌在37°C和持續(xù)中速搖動(dòng)下24小時(shí)培養(yǎng)期內(nèi)的動(dòng)態(tài)發(fā)育。每隔1小時(shí)測(cè)定OD600nm值，以變形鏈球菌的OD值為縱坐標(biāo)，以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，繪制生長(zhǎng)曲線。這種系統(tǒng)方法確保了在特定實(shí)驗(yàn)條件下精確跟蹤和記錄變形鏈球菌的生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)。根據(jù)CLSI（臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)研究所）標(biāo)準(zhǔn)化標(biāo)準(zhǔn)，將測(cè)試濃度的AgBr-NP CTMAB溶液施用到含有106 CFU/mL變形鏈球菌的平板上。這些濃度為10μg/mL、5μg/mL、2.5μg/mL、1.25μg/mL和0.625μg/mL。將溶液在37°C有氧條件下孵育24小時(shí)。每組一式三份。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。使用Bioscreen自動(dòng)生長(zhǎng)曲線分析儀捕獲變形鏈球菌的動(dòng)態(tài)生長(zhǎng)以及生長(zhǎng)曲線。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
AgBr-NP CTMAB溶液對(duì)浮游變形鏈球菌表現(xiàn)出強(qiáng)大的抗菌作用，最低殺菌濃度為5μg/mL。10μg/mL AgBr-NP CTMAB溶液可有效抑制變形鏈球菌生物膜的形成。(2)AgBr-NP CTMAB(10μg/mL和20μg/mL)浸泡后表面粗糙度與蒸餾水相比無顯著性差異(P>0.05)，Polident顯著高于蒸餾水(P<0.05)。與蒸餾水中相比，浸泡在Polident中的PMMA樣品的表面硬度顯著降低（P<0.05）。而浸泡在AgBr-NP CTMAB中后表面硬度沒有顯著差異（P>0.05）。彎曲強(qiáng)度結(jié)果表明AgBr-NP CTMAB與Polident和水之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。AgBrNP CTMAB可以有效抑制浮游生物形鏈球菌的生長(zhǎng)和生物膜的形成，而不影響PMMA的彎曲強(qiáng)度、顯微硬度或表面粗糙度。因此，AgBrNP CTMAB有望成為一種新型假牙清潔劑。
圖1、不同濃度AgBr-NP CTMAB對(duì)變形鏈球菌的生長(zhǎng)曲線。
圖2、AgBr-NP CTMAB對(duì)變形鏈球菌的抑制區(qū)域照片。在圖中，在陰性對(duì)照PBS組周圍沒有觀察到明顯的抑制圈，表明沒有顯著的抑制作用。然而，在用AgBr-NP CTMAB溶液處理的濾紙周圍觀察到明顯的抑制圈。500μg/mL AgBr-NP CTMAB濾紙可以達(dá)到與0.05%氯氰菊酯相似的抑制圈。
圖3、各組溶液孵育24 h后600 nm處的OD結(jié)果。在圖中OD600 nm值與NC組差異顯著，而2.5μg/mL、1.25μg/mL和0.625μg/mL AgBr-NP CTMAB溶液的OD600 nm值與陰性對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
圖4、孵育24 h后各組溶液的濁度。將各組溶液轉(zhuǎn)移至離心管中并拍照，10μg/mL、5μg/mL AgBr-NP CTMAB溶液和CPC溶液組與NC組相比，濁度明顯降低。2.5μg/mL、1.25μg/mL、0.625μg/mL AgBr-NP CTMAB溶液與陰性對(duì)照組的濁度無顯著差異。
圖5、不同溶液組中BHI瓊脂平板培養(yǎng)48小時(shí)后的菌落生長(zhǎng)情況。(A)原始溶液涂覆板的結(jié)果。(B)稀釋10,0000倍后涂板的結(jié)果。與NC組相比，5μg/mL、10μg/mL AgBr-NP CTMAB和0.1%氯化十六烷基吡啶溶液組均未見菌落。相比之下，2.5μg/mL、1.25μg/mL和0.625μg/mL的AgBr-NP CTMAB溶液組顯示菌落遍布整個(gè)平板，且菌落生長(zhǎng)與NC組相似。5μg/mL、10μg/mL AgBr-NP CTMAB溶液和0.1%氯化十六烷基吡啶溶液組均未發(fā)現(xiàn)菌落生長(zhǎng)。相比之下，2.5μg/mL、1.25μg/mL、0.625μg/mL的AgBr-NP CTMAB溶液組，隨著濃度的降低，菌落數(shù)量由稀疏變得密集，表明AgBr-NP CTMAB溶液組的抑菌能力增強(qiáng)。
總結(jié)
本論文研究AgBr納米顆粒（NP） CTMAB（十六烷基三甲基溴化銨）對(duì)變形鏈球菌（S.mutans）及其生物膜的抑制作用，并評(píng)估聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）表面粗糙度（Ra）、顯微硬度、和長(zhǎng)時(shí)間浸泡在AgBr-NP CTMAB中的彎曲強(qiáng)度，適用于義齒清潔行業(yè)。研究人員通過菌落形成試驗(yàn)、OD600和激光共聚焦顯微鏡測(cè)量AgBr-NP CTMAB對(duì)變形鏈球菌的抗菌活性。在浸泡溶液180或360天后測(cè)量樣品表面粗糙度、顯微硬度和彎曲強(qiáng)度(MPa)值的變化。AgBrNP CTMAB可以有效抑制浮游生物S.mutans的生長(zhǎng)和生物膜的形成，而不影響PMMA的彎曲強(qiáng)度、顯微硬度或表面粗糙度。因此研究人員認(rèn)為AgBrNP CTMAB有望成為一種新型假牙清潔劑。
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