化膿隱秘桿菌（Trueperella pyogenes），于1893年首次發(fā)現(xiàn)，原稱化膿棒狀桿菌（Corynebacterium pyogenes），化膿放線菌（Actinomyces pyogenes），1997年pascual Ramos et.al將該菌從放線菌屬中重新分類為隱秘桿菌屬。化膿隱秘桿菌在隱秘桿菌屬中致病性最強(qiáng)，同時(shí)也是一種條件性致病菌，化膿隱秘桿菌不僅感染牛羊豬等經(jīng)濟(jì)類動(dòng)物，同時(shí)也會(huì)感染貓，狗，兔，狐貍，猴，鵝，鴨等其他動(dòng)物。
化膿隱秘桿菌為革蘭氏陽(yáng)性菌種，且不易染色，具有多形性，多呈逗號(hào)狀、弧形或者短桿狀，無(wú)莢膜和芽孢，菌體著色不均，常散在，也有呈叢或2～4個(gè)并列排列?；撾[秘桿菌的生長(zhǎng)溫度為20～40℃，其中最適宜生長(zhǎng)溫度為37℃。好氧或兼性好氧，在5%～10%CO2環(huán)境條件下或添加血液、血清可促進(jìn)其生長(zhǎng)?；撾[秘桿菌在血瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)24～48 h后可形成針尖狀、表面光滑的、灰白色、直徑1 mm的菌落，并且在菌落周圍形成β-溶血環(huán)。
為了研究化膿隱秘桿菌的致病性，與免疫性，生長(zhǎng)曲線與毒力測(cè)定是重要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)采用BHI液體培養(yǎng)基對(duì)化膿隱秘桿菌HJ-1進(jìn)行培養(yǎng)，通過(guò)測(cè)定生長(zhǎng)曲線對(duì)化膿隱秘桿菌HJ-1的生長(zhǎng)規(guī)律進(jìn)行了解，同時(shí)測(cè)定化膿隱秘桿菌HJ-1菌株對(duì)小鼠的半數(shù)致死量，為后續(xù)化膿隱秘桿菌的疫苗研發(fā)奠定基礎(chǔ)。
化膿隱秘桿菌HJ-1型生長(zhǎng)曲線的測(cè)定及細(xì)菌計(jì)數(shù)
將化膿隱秘桿菌HJ-1型純培養(yǎng)后，取37℃恒溫?fù)u床培養(yǎng)48 h的化膿隱秘桿菌HJ-1型菌液，按1%的比例接種到30 mL 5%BHI液體培養(yǎng)基中，于37℃80 rpm恒溫培搖床中培養(yǎng)，分別在培養(yǎng)0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24 h各時(shí)間點(diǎn)取菌液1 mL，并以5%BHI液體培養(yǎng)基為對(duì)照組測(cè)定其OD600值，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)重復(fù)測(cè)定3次，取其平均值。
取培養(yǎng)至2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24 h時(shí)間點(diǎn)的化膿隱秘桿菌的菌液，做10倍比稀釋，即取100μL菌液加入到900μL的生理鹽水中，充分混勻后，從中取100μL加入到900μL的生理鹽水中，充分混勻，依次稀釋，使最終的稀釋倍數(shù)為1、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8，然后各取菌液100μL，均勻涂布到血液營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，每個(gè)梯度重復(fù)3次，置于37℃恒溫過(guò)夜培養(yǎng)，48 h后計(jì)數(shù)平板菌落數(shù)，有效計(jì)數(shù)為每個(gè)平板20～300個(gè)菌落。做細(xì)菌活體計(jì)數(shù)，觀察化膿隱秘桿菌HJ-1型生長(zhǎng)狀況并繪制該菌株的生長(zhǎng)曲線。
化膿隱秘桿菌HJ-1細(xì)菌計(jì)數(shù)及生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
根據(jù)（表1）顯示表明：化膿隱秘桿菌HJ-1型在37℃恒溫?fù)u床培養(yǎng)0～4 h細(xì)菌生長(zhǎng)緩慢從8 h開(kāi)始細(xì)菌快速生長(zhǎng)，12～14 h為化膿隱秘桿菌HJ-1型的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，生長(zhǎng)至22 h細(xì)菌生長(zhǎng)至高峰，此時(shí)的OD600值為0.81，菌落數(shù)為6.4×1011cfu（表2），之后化膿隱秘桿菌HJ-1型進(jìn)入平臺(tái)期（圖1）。
表1化膿隱秘桿菌HJ-1生化鑒定結(jié)果
表2化膿隱秘桿菌細(xì)菌計(jì)數(shù)
化膿隱秘桿菌HJ-1型感染小鼠半數(shù)致死量測(cè)定
實(shí)驗(yàn)組前期已經(jīng)測(cè)定，化膿隱秘桿菌HJ-1型感染小鼠最大致死量（Dm）為1.84×109cfu，逐步降低攻毒計(jì)量，直到測(cè)的小鼠未發(fā)生死亡的感染計(jì)量。并測(cè)定了該株化膿隱秘桿菌感染小鼠最低致死量（Dn）為1.53×108cfu，根據(jù)改進(jìn)寇氏算法計(jì)算出化膿隱秘桿菌HJ-1感染小鼠的半數(shù)致死量，結(jié)果見(jiàn)（表3）。
表3化膿隱秘桿菌HJ-1型感染小鼠半數(shù)致死量測(cè)定
圖1化膿隱秘桿菌HJ-1型生長(zhǎng)曲線
根據(jù)公式：半數(shù)致死量公式logLD50=Xm-i（Σp-0.5）
測(cè)定HJ-1型化膿隱秘桿菌半數(shù)致死量為：4.16×108cfu
結(jié)論
測(cè)定了化膿隱秘桿菌HJ-1的生長(zhǎng)曲線，確定其對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期為12～14 h，處于該時(shí)期的菌活力最強(qiáng)，感染能力最好，用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的化膿隱秘桿菌進(jìn)行感染具有更好的致病性。測(cè)定了化膿隱秘桿菌HJ-1型對(duì)小鼠的半數(shù)致死量LD50=4.16×108cfu。試驗(yàn)結(jié)果為以后研究化膿隱秘桿菌的致病力與對(duì)動(dòng)物的接種試驗(yàn)提供了依據(jù)。
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