結(jié)果
1 溫度對VNP20009生長的影響
如圖1A所示，在42 ℃時，VNP20009的生長與37 ℃時相比沒有顯著性差異；在45 ℃時，其生長顯著減緩。
為進一步評價不同溫度下VNP20009的生長，統(tǒng)計了不同溫度下VNP20009的菌落形成情況（圖1B）并分析了溫度對細菌存活的影響（圖1C、D）。在42 ℃時，細菌存活率為85.6%，當暴露于45 ℃時，存活率為0。
通過評估細菌細胞在玻璃管上的黏附性來檢測生物膜的形成，當在玻璃管中進行細菌培養(yǎng)時，會在氣液交界形成一圈生物膜，通過結(jié)晶紫染色可使其顯現(xiàn)。如圖1E所示，隨著溫度的升高，細菌生物膜的形成量逐漸減少，與37 ℃組相比存在顯著差異（圖1F）。
圖1 不同溫度下VNP20009的生長與生物膜形成情況。A：VNP20009在600 nm波長下的生長曲線；B：不同溫度下的菌落耐受性；C：42℃條件下VNP20009的存活率；D：45℃條件下VNP20009的存活率。n=5，均值±平均標準誤（SEM）。菌落形成單位（CFU）是微生物學中用于估算樣品中存活細菌或真菌數(shù)量的單位；E：采用玻璃試管結(jié)晶紫（CV）染色法測定不同溫度下VNP20009的生物膜形成；F：使用ImageJ軟件定量生物膜含量。n=3，均值±SEM。*與37℃組相比P < 0.05，P < 0.01，**P < 0.0001。
2 pH值對VNP20009生長的影響
在37 ℃條件下，考察pH值對VNP20009生長的影響。結(jié)果顯示（圖2A），在pH 6.5～8.5內(nèi)，VNP20009的生長沒有明顯差異。但在pH 5.0條件下，VNP20009生長慢于對照組（pH 7.0），表明VNP20009的生長受到抑制。
在不同pH條件下，VNP20009的存活率受到影響。當pH值為5時，細菌存活率為70.7%；pH值為6.5時，細菌存活率85.6%。而pH值增大到8.5時，細菌存活率與對照組沒有顯著性差異，但菌落面積減?。▓D2B～E）。
pH值是細菌生物膜形成的一個重要影響因素。如圖2F所示，pH 7.0時能形成較多的生物膜，但在pH 5.0時，生物膜形成量達到最大，pH 8.5時，生物膜形成量減少，兩者均與pH 7.0時的形成量存在顯著差異（圖2G）。
圖2 不同pH值下VNP20009的生長與生物膜形成情況。A：VNP20009在600 nm波長下的生長曲線；B：不同pH值下的菌落耐受性；C-E：不同pH值下VNP20009的存活率。n=5，均值±SEM；F：采用玻璃試管結(jié)晶紫染色法測定不同pH值下VNP20009的生物膜形成；G：使用ImageJ軟件定量生物膜含量。n=3，均值±SEM。*與pH 7.0組相比P < 0.05，P < 0.01，**P < 0.0001。ns：無顯著差異
3 H?O?對VNP20009生長的影響
本文同時探究了過氧化條件對VNP20009的生長影響。結(jié)果表明（圖3A），H?O?對VNP20009的生長有影響。隨著H?O?濃度的增加（1.5～2.5 mmol·L?1），VNP20009的生長逐漸減緩直至完全不生長（5 mmol·L?1）。VNP20009可在低濃度H?O?（1 mmol·L?1）條件下存活，生長沒有影響。
如圖3B所示，在不同濃度H?O?下，VNP20009的生長受到不同程度的抑制。隨著H?O?濃度的增加，細菌存活率逐漸下降（圖3C）。添加1～2 mmol·L?1 H?O?時，細菌存活率從53.9%下降至12.6%，當H?O?濃度達到2.5 mmol·L?1時，細菌存活率為0。
H?O?處理后，細菌生物膜形成量與生長表現(xiàn)出一致的趨勢（圖3D、E），1 mmol·L?1 H?O?對生物膜形成影響并不顯著，當含量為1.5 mmol·L?1時出現(xiàn)了顯著性差異，持續(xù)增加H?O?含量，則完全不生成生物膜。
圖3 不同過氧化氫濃度下VNP20009的生長與生物膜形成情況。A：VNP20009在600 nm波長下的生長曲線；B：不同過氧化氫濃度下的菌落耐受性；C：不同過氧化氫濃度下VNP20009的存活率。n=5，均值±SEM；D：采用玻璃試管結(jié)晶紫染色法測定不同過氧化氫濃度下VNP20009的生物膜形成；E：使用ImageJ軟件定量生物膜含量。n=3，均值±SEM。與0 mmol·L-1組相比P < 0.05，P < 0.01，P < 0.001，P < 0.0001
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