摘要：通過(guò)對(duì)畜禽屠宰環(huán)境和畜禽肉中單增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)的污染情況及其分離株生物學(xué)特性進(jìn)行分析,以便為畜禽屠宰和銷售環(huán)節(jié)中LM風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)提供數(shù)據(jù),為防控LM的污染奠定基礎(chǔ)。隨機(jī)采取屠宰場(chǎng)環(huán)境、畜禽胴體及污水樣品,參照國(guó)標(biāo)方法經(jīng)增菌、分離,對(duì)可疑為L(zhǎng)M的菌落進(jìn)行PCR鑒定,對(duì)分離菌株進(jìn)行血清分型、多位點(diǎn)序列分型(MLST)、生物被膜形成能力、生長(zhǎng)曲線和消毒劑最小抑菌濃度(MIC)的分析。結(jié)果:1 239份樣本檢出58株單增李斯特菌,檢出率為4.68%,胴體、屠宰環(huán)境、屠宰污水在各自樣本中檢出率分別為4.81%、4.80%、3.48%;58株LM有1/2a(8.62%)、1/2b(44.83%)、1/2c(46.55%)這3種血清型,19種序列型(ST);25株LM分離株生物被膜和生長(zhǎng)能力強(qiáng)于參考株;甲醛溶液、苯扎溴銨、碘溶液和氫氧化鈉4種消毒劑對(duì)7~10株LM分離株的MIC值高于參考株。綜上,畜禽屠宰場(chǎng)及農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)中存在LM污染,且菌株具有一定的抗逆性。
單核細(xì)胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM），簡(jiǎn)稱單增李斯特菌，隸屬李斯特菌屬，革蘭陽(yáng)性短桿狀，兼性厭氧或需氧，在2～45℃均可生長(zhǎng)，廣泛存在于如植被、土壤、地表水等環(huán)境中。在LM血清型中，1/2a、1/2b和4b這3種血清型相比于其他血清型致病性更強(qiáng)，可引起人畜李斯特菌病，病死率高達(dá)20％～30％。在20世紀(jì)80年代，LM被確定為重要的食源性病原菌。
畜禽屠宰環(huán)節(jié)是造成LM污染肉品的重要途徑。在印度旁遮普邦，從肉店和屠宰場(chǎng)采集的山羊肉、綿羊肉和拭子樣本中LM的檢出率分別為1.82％、3.21％和6.66％；比利時(shí)北部的3個(gè)肉牛、生豬屠宰場(chǎng)的樣品，牛、豬胴體中LM的檢出率分別為46％和22％。國(guó)內(nèi)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，牛羊養(yǎng)殖場(chǎng)和屠宰環(huán)境中的5214份樣本中，LM分離率分別為0.5％和9.4％；天津市生魚(yú)肉中LM檢出率為6.2％；蘇州市各類肉食品的LM檢出率為6.4％。由此可見(jiàn)，屠宰環(huán)節(jié)中LM的存在，是污染肉類產(chǎn)品的主要原因，具有引起人畜感染李斯特菌的潛在風(fēng)險(xiǎn)。本研究對(duì)甘肅省畜禽屠宰場(chǎng)環(huán)境及畜禽肉中LM的污染情況進(jìn)行調(diào)查，對(duì)LM分離菌株的生物學(xué)特性進(jìn)行分析，以便為畜禽屠宰環(huán)節(jié)中LM風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)提供數(shù)據(jù)，為防控LM的污染提供參考。
材料與方法
菌株及樣品：標(biāo)準(zhǔn)菌株LM ATCC19115購(gòu)自美國(guó)細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心。2023年3月至2023年10月間，于甘肅省6地市屠宰場(chǎng)環(huán)境、污水和畜禽胴體表面隨機(jī)采集1239份樣品。樣品來(lái)源地包括天水市（132份）、定西市（427份）、白銀市（75份）、慶陽(yáng)市（160份）、平?jīng)鍪校?72份）、甘南（173份）。樣品類型包括畜禽胴體表面（191份）、屠宰環(huán)境器具表面（833份）和污水（115份）。涉及的動(dòng)物種類包括雞（187份）、豬（706份）、牛（170份）和羊（143份）。
試劑與儀器：使用了LM肉湯（LB1和LB2）、LM顯色培養(yǎng)基、PALCAM瓊脂基礎(chǔ)、腦心浸液肉湯（BHI）、吖啶黃、萘啶酮酸、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、LM診斷血清試劑盒、細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒、結(jié)晶紫染色液、無(wú)水乙醇、甲醇等試劑。使用了臥式恒溫振蕩器、PCR儀、恒溫培養(yǎng)箱、立式自動(dòng)壓力蒸汽滅菌器、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱等儀器。
樣品采集：使用沾取滅菌生理鹽水的棉拭子在畜禽胴體、屠宰環(huán)境表面揩抹多次后，將棉拭子置于含5mL滅菌生理鹽水離心管，污水直接用50mL離心管盛取。樣品放入有冰袋的采樣箱中，盡快送實(shí)驗(yàn)室4℃保存。
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