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斜帶石斑魚哈維氏弧菌分離純化、生長(zhǎng)曲線繪制及耐藥性研究（三）

來(lái)源：安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 發(fā)布時(shí)間:2025-06-10 15:24:11 瀏覽：278 次

2.5藥敏試驗(yàn)結(jié)果

由表3可知，藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，斜帶石斑魚源哈維氏弧菌對(duì)環(huán)丙沙星（CIP）、諾氟沙星（NOR）、頭孢氨芐（CN）、左氧氟沙星（LVX）、米諾環(huán)素（MI）、萬(wàn)古霉素（VAN）、慶大霉素（GEN）、氟苯尼考（FFC）、多西環(huán)素（DO）、四環(huán)素（TET）、阿米卡星（AMK）、亞胺培南（IPM）敏感，對(duì)青霉素G（PEN）、氨曲南（AZI）、頭孢唑林（CZ）、頭孢哌酮（CPZ）、鏈霉素（S）、氨芐西林（AMP）、哌拉西林（PIP）、頭孢呋辛（CXM）、頭孢他啶（CAZ）、克林霉素（CC）、紅霉素（E）、多黏菌素B（PB）不敏感。

2.6細(xì)菌生長(zhǎng)曲線

根據(jù)不同時(shí)間點(diǎn)分光光度計(jì)檢測(cè)結(jié)果和活菌計(jì)數(shù)結(jié)果繪制哈維氏弧菌S1的生長(zhǎng)曲線（圖5、6），結(jié)果顯示，哈維氏弧菌S1指數(shù)生長(zhǎng)時(shí)間為5～12h，在該階段中，哈維氏弧菌S1快速增殖，在12h出現(xiàn)峰值，隨后OD600下降后趨于平穩(wěn)，活菌計(jì)數(shù)結(jié)果與OD600的變化趨勢(shì)基本吻合。

哈維氏弧菌S1的OD600與培養(yǎng)時(shí)間的關(guān)系表達(dá)式為：

Y1=0.0298200+0.0205400X+0.0247900X2-0.0007134X3（R2=0.9977）

哈維氏弧菌S1的菌落形成數(shù)量與培養(yǎng)時(shí)間的關(guān)系表達(dá)式為：

Y2=1387675+387588433X-306607341X2+65425698X3（R2=0.5418）

上述公式R2均大于0.4，表明哈維氏弧菌S1的OD600、菌落形成數(shù)量與培養(yǎng)時(shí)間具有相關(guān)性，但公式中哈維氏弧菌S1的菌落形成數(shù)量與培養(yǎng)時(shí)間的關(guān)系表達(dá)式R2lt;0.99，不足以作為直接計(jì)算公式預(yù)測(cè)哈維氏弧菌S1菌落形成數(shù)量數(shù)值，而哈維氏弧菌S1的OD600與培養(yǎng)時(shí)間的關(guān)系表達(dá)式R2gt;0.99，具有預(yù)測(cè)意義。

3結(jié)論與討論

對(duì)暴發(fā)病害的湛江斜帶石斑魚養(yǎng)殖場(chǎng)樣品Ec 1、Ec 2、Ec 3進(jìn)行目檢時(shí)，其皮膚表面的白色隆起疥瘡是最顯著特征，因此初步懷疑是諾卡氏菌感染導(dǎo)致魚體皮膚、肌肉和內(nèi)臟滋生白色結(jié)節(jié)。但在隨后的解剖檢查中發(fā)現(xiàn)，Ec 1、Ec 2、Ec 3肌肉與內(nèi)臟均無(wú)白色結(jié)節(jié)，證明并不是諾卡氏菌感染。但Ec 1、Ec 2、Ec 3皮膚病變同常見石斑魚感染哈維氏弧菌后的癥狀，如大面積潰爛、暴露肌肉組織，都有明顯差異。此外Ec 1、Ec 2、Ec 3肝臟都有充血現(xiàn)象，這同半滑舌鰨感染哈維氏弧菌8-0635癥狀一致。肝臟細(xì)菌分離純化后鑒定結(jié)果同2021年SBY-G的分離純化后鑒定結(jié)果相同，證明哈維氏弧菌S1感染魚體體內(nèi)組織，具有致病力。但脾臟糜爛的癥狀較少在哈維氏弧菌感染的魚類身上出現(xiàn)，不排除與感染程度有關(guān)，也可能還有其他細(xì)菌共感染導(dǎo)致這一癥狀。

16SrRNA是細(xì)菌高度保守的基因，是對(duì)細(xì)菌進(jìn)行分類與鑒定的重要參考標(biāo)準(zhǔn)之一，選擇這一基因?qū)S氏弧菌S1進(jìn)行分類鑒定。哈維氏弧菌S1的16SrRNA的鑒定結(jié)果同2018年被報(bào)道的V.harveyihq-V149明確地聚為一支，同其他主要流行的哈維氏弧菌分類地位較遠(yuǎn)，說(shuō)明哈維氏弧菌S1感染途徑更易追蹤，并且對(duì)海水養(yǎng)殖中的哈維氏弧菌傳播途徑的相關(guān)研究具有更深意義。

16S rRNA鑒定結(jié)果與藥敏結(jié)果結(jié)合，讓它的藥敏試驗(yàn)更具研究意義。與其他哈維氏弧菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較，其他石斑魚源哈維氏弧菌毒株敏感的氯霉素，哈維氏弧菌S1對(duì)其變成了中度敏感，而其他石斑魚源哈維氏弧菌毒株不敏感的抗生素，如鏈霉素，哈維氏弧菌S1依舊不敏感。當(dāng)然也有其他石斑魚源哈維氏毒株不敏感的四環(huán)素，哈維氏弧菌S1卻對(duì)其敏感，而從患病泥蚶上分離出的哈維氏弧菌J14等同樣對(duì)四環(huán)素敏感，卻與哈維氏弧菌S1同源性并不高。哈維氏弧菌S1在藥敏試驗(yàn)中同其他毒株有差異的結(jié)果進(jìn)一步體現(xiàn)了它在傳播途徑和進(jìn)化地位上與較多報(bào)道的致病哈維氏弧菌的差異性，證明其研究?jī)r(jià)值。這對(duì)研究不同毒株哈維氏弧菌毒力因子差異以及造成的病理現(xiàn)象差異有一定參考價(jià)值，而對(duì)不同毒株的哈維氏弧菌感染后是否會(huì)造成轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平的差異化表達(dá)的研究，也是未來(lái)需要哈維氏弧菌S1的分離與鑒定作為研究基礎(chǔ)的研究之一。

為后續(xù)對(duì)斜帶石斑魚源的哈維氏弧菌S1研究試驗(yàn)準(zhǔn)備，對(duì)哈維氏弧菌S1的生長(zhǎng)曲線進(jìn)行繪制，發(fā)現(xiàn)哈維氏弧菌S1在5h時(shí)OD600進(jìn)入0.4～0.6范圍，隨后快速增長(zhǎng)，因此哈維氏弧菌S1在5h時(shí)進(jìn)入對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期。而在12h后進(jìn)入平臺(tái)期，但活菌計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，16h是菌落形成數(shù)量結(jié)果最高的時(shí)間點(diǎn)。而在16h之后，菌落形成數(shù)量有明顯下降，但OD600數(shù)值穩(wěn)定，證明此時(shí)哈維氏弧菌S1進(jìn)入衰亡期，TSB液體培養(yǎng)基中總菌數(shù)沒(méi)有明顯變化，但活菌數(shù)快速減少。哈維氏弧菌S1OD600和菌落形成數(shù)量的生長(zhǎng)曲線證明，OD600和菌落形成數(shù)量并不成線性關(guān)系，無(wú)法通過(guò)時(shí)間或者OD600檢測(cè)結(jié)果直接預(yù)測(cè)菌落形成數(shù)量，但時(shí)間和OD600檢測(cè)結(jié)果同菌落形成數(shù)量仍存在相關(guān)性。根據(jù)生長(zhǎng)曲線繪制結(jié)果，可以判斷，5～16h是哈維氏弧菌S1的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，活性強(qiáng)，適宜使用這期間的菌液進(jìn)行試驗(yàn)。

斜帶石斑魚哈維氏弧菌分離純化、生長(zhǎng)曲線繪制及耐藥性研究（三）

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