2結(jié)果與分析
2.1降解菌株的篩選與分離鑒定
從草銨膦污染的土壤中取樣，經(jīng)過兩次稀釋涂布和初步的富集培養(yǎng)，分離純化得到1個(gè)草銨膦降解菌株，命名為C6。形態(tài)觀察結(jié)果（圖1）顯示，C6菌株菌落為光滑圓形，乳白色，直徑約為1.0 mm，邊緣整齊不透明；在100倍顯微鏡下觀察為透明，長桿狀。
以C6菌株基因組DNA為模板、27F/1492R為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到長度約為1.5 kb的擴(kuò)增產(chǎn)物。測(cè)序結(jié)果在NCBI數(shù)據(jù)庫進(jìn)行blast同源比對(duì)分析，結(jié)果表明C6菌株與Delftiasp.的基因同源性最高，達(dá)96％以上。系統(tǒng)發(fā)育樹分析結(jié)果顯示，C6與戴爾福特菌屬（Delftiasp.）聚在一起。綜合菌落特征與16S rDNA基因序列，初步認(rèn)定C6菌株為戴爾福特菌屬菌株（圖2）。
2.2 C6菌株對(duì)草銨膦的降解情況
C6菌株在接種量10%、含300 mg·L-1的草銨膦培養(yǎng)基中，30℃、150 r·min-1的條件下振蕩3 d，經(jīng)超高效液相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜儀測(cè)定，C6菌株對(duì)草銨膦的降解率高達(dá)69.01%。
2.3培養(yǎng)基體積與氮源對(duì)C6菌株生長的影響
不同培養(yǎng)基體積影響C6菌株的生長，如圖3A所示，在25～200 mL的基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基中，C6菌株均能正常生長；在25～75 mL范圍內(nèi)，C6菌株的生長呈快速上升趨勢(shì)，且體積為75 mL時(shí)，OD值達(dá)到最大，為0.136；當(dāng)體積大于75 mL時(shí)，隨著基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基體積的增大，OD值呈下降趨勢(shì)，至200 mL時(shí)降至最低。
不同氮源培養(yǎng)基對(duì)C6菌株生長的影響如圖3B所示，C6菌株分別在100 mg·L-1的硝酸鈉、硝酸銨、氯化銨和硫酸銨為唯一氮源的培養(yǎng)基中均可以生長，但菌株的生長情況因氮源種類的不同而有差異。當(dāng)?shù)词橇蛩徜@時(shí)，C6菌株的生長處于最佳狀態(tài)，OD值最大；其次是硝酸銨，而在以硝酸鈉為氮源的培養(yǎng)基中，生長最差。
2.4草銨膦初始濃度與培養(yǎng)基初始pH值對(duì)C6菌株生長的影響
草銨膦初始濃度對(duì)C6菌株的影響，培養(yǎng)基中草銨膦濃度在10～200 mg·L-1的范圍內(nèi)，降解菌株C6的生長速度隨濃度的增加而提高，在200 mg·L-1時(shí)達(dá)到最大值；當(dāng)草銨膦初始濃度大于200 mg·L-1時(shí)，C6菌株的生長量隨著草銨膦初始濃度的增加而降低。
培養(yǎng)基初始pH值對(duì)C6菌株的生長影響，當(dāng)培養(yǎng)基初始pH值在4.0～8.5間，C6菌株的生長隨著pH值的升高而升高；pH值為8.5時(shí)最有利于C6菌株的生長；當(dāng)pH值大于8.5時(shí)，C6菌株的生長量快速下降。結(jié)果表明，過酸或過堿的培養(yǎng)基不適宜C6菌株的生長。
2.5培養(yǎng)溫度與菌懸液接種量對(duì)C6菌株生長的影響
C6菌株在20～45℃的范圍內(nèi)均可生長，但不同溫度下生長速度有明顯差異。培養(yǎng)基溫度為20～25℃時(shí)，C6菌株的生長隨著溫度升高而增加，25℃時(shí)達(dá)到最大值，為0.155；當(dāng)溫度大于25℃時(shí)，C6菌株的生長明顯下降，表明C6菌株生長的最適溫度為25℃。
在一定范圍內(nèi)，接種量的增加可以加快C6菌株的生長速率，縮短延滯期。當(dāng)接種量超過15%時(shí)，C6菌株的生長下降，表明C6菌株的適宜菌株接種量為15％。
2.6 Na+與Mg2+濃度對(duì)C6菌株生長的影響
C6菌株在Na+濃度為5～100 g·L-1的培養(yǎng)基中均可以生長，但生長速度有明顯不同。在50 g·L-1氯化鈉培養(yǎng)基中，C6菌株生長最差，在20 g·L-1氯化鈉培養(yǎng)基中生長最好。
C6菌株在Mg2+濃度為50～400 mg·L-1的培養(yǎng)基中均可以生長，但稍有差異。其中，菌株C6在200 mg·L-1氯化鎂培養(yǎng)基中的生長最差，在100 mg·L-1氯化鎂培養(yǎng)基中的生長最好。
3討論
本文從長期噴灑草銨膦的香蕉果園土壤中分離出1株微生物降解菌C6菌株，經(jīng)過純化鑒定，確定其屬于戴爾福特菌屬。已有研究表明，戴爾福特菌屬在生態(tài)環(huán)境領(lǐng)域的降解優(yōu)勢(shì)，如田爽等從長期受農(nóng)藥苯磺隆污染的土壤中篩選鑒定1株降解菌株B2，B2與多株戴爾福特菌屬細(xì)菌的16S rDNA序列同源性達(dá)99%；陳思雨等從白洋淀重金屬污染土壤中獲得10個(gè)戴爾福特菌屬菌株，對(duì)高濃度Pb２+和Cr（Ⅵ）具有明顯抗性；趙曉燕等發(fā)現(xiàn)一株辛硫磷降解菌株戴爾福特菌D39，進(jìn)一步分析機(jī)理證明降解活性部位主要是胞內(nèi)酶。廖家龍等從活性污泥中發(fā)現(xiàn)群體感應(yīng)淬滅高效菌株，其中戴爾福特菌株JL5能夠在10 h內(nèi)完全降解N-己酰高絲氨酸內(nèi)酯。
目前尚未見對(duì)降解草銨膦菌株的相關(guān)報(bào)道，本文首次從草銨膦污染土壤中分離出戴爾福特菌，對(duì)未來除草劑的生物降解提供了新的微生物資源。同時(shí)，試驗(yàn)得出C6菌株培養(yǎng)最適宜條件為：培養(yǎng)基體積為75 mL、氮源為硫酸銨、草銨膦初始濃度200 mg·L-1、初始pH值8.5、培養(yǎng)溫度25℃、菌懸液接種量15%、Na+濃度20 g·L-1、Mg2+濃度為100 mg·L-1。
與此同時(shí)，本文所篩選出來的C6菌株是在特定的生長環(huán)境（香蕉園）中培養(yǎng)的結(jié)果，而根據(jù)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的發(fā)展，單一品種的農(nóng)藥不再能滿足生產(chǎn)的需求，往往在生產(chǎn)中會(huì)混合施用不同種類的農(nóng)藥，多種農(nóng)藥的混合施用會(huì)導(dǎo)致土壤中農(nóng)藥殘留部分的成分逐漸復(fù)雜，這也增加了微生物降解工作的挑戰(zhàn)性。因此C6菌株在復(fù)雜除草劑污染環(huán)境中的降解效率等方面需要進(jìn)一步的研究和探討。
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