發(fā)熱伴血小板綜合征病毒(Severe fever with thrombocytopeniasyndrome，SFTSV)，主要以發(fā)熱，胃腸道癥狀、血小板減少為主要臨床表現(xiàn)的感染性病例，少數(shù)患者因多器官衰竭死亡的情況。SFTSV的主要宿主是蜱蟲(chóng)，該病毒在中國(guó)中東部湖北、河南、浙江、山東等地以及日本和韓國(guó)流行。主要感染中老年人，感染后會(huì)出現(xiàn)高熱、厭食、肌肉痛、寒戰(zhàn)、淋巴結(jié)腫大、血小板減少等癥狀。
目前缺乏針對(duì)SFTSV的特異性治療藥物，只能進(jìn)行廣譜抗病毒治療和對(duì)癥下藥，這為SFTS的預(yù)防和控制帶來(lái)極大的困難。由于平常的藥物篩選是通過(guò)SFTSV的活病毒進(jìn)行藥物篩選，耗時(shí)長(zhǎng)，成本大。
鑒于此，技術(shù)人員提供了一種解決方案——一種表達(dá)熒光素酶基因的發(fā)熱伴血小板綜合征病毒。
SFTSV-Nluc的重組病毒的鑒定
測(cè)定SFTSV-Nluc，將SFTSV-Nluc與野生型的SFTSV-WT共同加入到Vero細(xì)胞中培養(yǎng)相同的時(shí)間。取12，24，36，48，72，96小時(shí)6個(gè)時(shí)間點(diǎn)的樣品測(cè)定病毒的擴(kuò)增滴度。如圖2所示，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)SFTSV-Nluc與SFTSV-WT的擴(kuò)增水平一致，說(shuō)明Nluc基因的加入并沒(méi)有影響SFTSV的生長(zhǎng)曲線(xiàn)。
為了測(cè)定SFTSV-Nluc表達(dá)Nluc基因的能力，將重組病毒SFTSV-Nluc和SFTSV-WT按照MOI＝0.01的感染方式感染Vero細(xì)胞，在感染12，24，36，48，72和96小時(shí)后收取細(xì)胞使用Nano-Glo luciferase Assay System(Promega)試劑盒檢測(cè)病毒表達(dá)Nluc的能力。熒光強(qiáng)度Luciferase activity可以說(shuō)明Nluc表達(dá)的能力。如圖3說(shuō)明SFTSV-Nluc的Nluc是正常表達(dá)的，并且隨著感染時(shí)間的增加Nluc的表達(dá)量也隨之增加，證明實(shí)驗(yàn)得到的SFTSV-Nluc可以在細(xì)胞水平快速檢測(cè)。并且可以根據(jù)穩(wěn)定表達(dá)的Nluc基因來(lái)示蹤病毒的感染情況。
圖SFTSV-Nluc和SFTSV-WT的病毒生長(zhǎng)曲線(xiàn)
該熒光素酶重組病毒株可以用于小鼠酶活成像系統(tǒng)建立快速高通量的抗病毒藥物篩選技術(shù)或平臺(tái)，為活體動(dòng)物成像、藥物篩選、藥物作用機(jī)制及疫苗評(píng)價(jià)等提供廣泛的應(yīng)用價(jià)值。
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