間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stromal/stem cell，MSC)，是一類存在于多種組織(如骨髓、臍帶血、臍帶組織、胎盤組織和脂肪組織等)，具有多向分化潛能，非造血干細(xì)胞的成體干細(xì)胞。這類干細(xì)胞具有向多種間充質(zhì)系列細(xì)胞(如成骨、成軟骨及成脂肪細(xì)胞等)或非間充質(zhì)系列的細(xì)胞分化潛能，并具有獨(dú)特的細(xì)胞因子分泌功能。
間充質(zhì)干細(xì)胞的多能性(Multipotent)是指具有形成機(jī)體內(nèi)超過一種類型細(xì)胞的能力，在體外可誘導(dǎo)分化為骨和脂肪等多種功能細(xì)胞，并能表達(dá)調(diào)控細(xì)胞向其他組織細(xì)胞類型或器官分化的基因特性(如SSEA-4、OCT-4、SOX-2和NANOG基因均為多能性基因)。間充質(zhì)干細(xì)胞是以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新細(xì)胞的特性，包括細(xì)胞周期中各不同階段所占比例以及細(xì)胞分裂過程中細(xì)胞數(shù)量隨時(shí)間變化的特征。需要對(duì)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞hUC-MSCs存活率、直徑和生長(zhǎng)曲線進(jìn)行檢測(cè)，以把控間充質(zhì)干細(xì)胞的質(zhì)量要求。
圖為臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。
一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞存活率、直徑和生長(zhǎng)曲線的檢測(cè)方法，包括以下步驟：
1)將臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞接種于細(xì)胞培養(yǎng)板中，在37℃和體積濃度為5％CO2
下進(jìn)行培養(yǎng)，收集細(xì)胞；
所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的接種密度為1×105細(xì)胞/ml；
2)將所述步驟1)得到的細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，將所述細(xì)胞懸液在細(xì)胞活力分析儀上分析細(xì)胞存活率、直徑和生長(zhǎng)曲線；
所述細(xì)胞懸液的濃度為5×105～1×107細(xì)胞/ml。
臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的代數(shù)為2～6代。
細(xì)胞培養(yǎng)板為6孔細(xì)胞培養(yǎng)板。
培養(yǎng)的時(shí)間為10h。
培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基包括無(wú)血清培養(yǎng)基，每孔添加量為2ml。
收集細(xì)胞的方法包括：在4℃、1200rpm下離心6min。
使用PBS緩沖液制備細(xì)胞懸液，所述PBS緩沖液的組分為NaCl8g/L、Na2HPO4·12H2O 2.9g/L、KCl 0.2g/L和KH2、PO4 0.2g/L。
優(yōu)選的，每間隔12h分析1次。
檢測(cè)的機(jī)理為：通常認(rèn)為細(xì)胞膜喪失完整性即細(xì)胞死亡。有完整細(xì)胞膜的活性細(xì)胞能夠抵御臺(tái)盼藍(lán)；而喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞通透性增加，可被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色。細(xì)胞活力分析儀通過成像系統(tǒng)色調(diào)的對(duì)比實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞存活率的精確分析。
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