細胞復(fù)蘇是指將凍存在液氮或低溫冰箱中的細胞解凍后重新培養(yǎng)，使其恢復(fù)生長的過程。細胞復(fù)蘇過程中，需要遵循快速融化的原則，這樣可以保證細胞外結(jié)晶短時間內(nèi)融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)再形成冰晶對細胞造成損傷。細胞復(fù)蘇后1-2天，細胞活性會逐漸得到恢復(fù)（如圖1為復(fù)蘇HEK293T細胞數(shù)對數(shù)值）。
細胞復(fù)蘇的主要實驗過程如下：
步驟1：從液氮容器或低溫冰箱中取出凍存管，迅速將其浸入37℃的溫水中，并不時搖動以使其盡快融化。37℃水浴時間盡可能短（1-2min），因為延長時間會增加細胞死亡率；
步驟2：當細胞完全融化后，從水浴中取出凍存管，用酒精棉球消毒外部，然后開啟瓶蓋；
步驟3：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中，加入適量的培養(yǎng)液，并進行離心，以去除DMSO和死細胞；
步驟4：離心后，棄去上清液，用新的培養(yǎng)液重懸細胞，并計數(shù)，調(diào)整細胞密度；
步驟5：將細胞接種到培養(yǎng)瓶中，37℃靜置培養(yǎng)。在培養(yǎng)初期，應(yīng)注意觀察細胞狀態(tài)，以確保其正常生長。
圖1.HEK-293T細胞生長曲線（復(fù)蘇后）
圖2.細胞復(fù)蘇操作流程圖
細胞復(fù)蘇注意事項
1.注意無菌操作，避免細胞污染，可使用支原體去除噴霧劑提前對實驗室環(huán)境，培養(yǎng)箱進行處理；
2.融化細胞時，溫度和時間應(yīng)嚴格控制，以避免對細胞造成損傷；
3.在細胞接種后，應(yīng)定期觀察細胞生長情況，疑似支原體污染時可使用可視化LAMP支原體檢測試劑盒檢測，若發(fā)生支原體污染，可使用支原體去除試劑及時處理。
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