青枯雷爾氏菌物種復合體(Ralstonia solanacearum species complex,RSSC)具有高致病性，能夠感染來自50個植物科的200多種植物，包括番茄、辣椒、土豆、香蕉、茄子和煙草等重要的農(nóng)作物或經(jīng)濟作物。青枯雷爾氏菌(R.solanacearum)(以下簡稱青枯菌)因其遺傳多樣性、廣泛的宿主范圍、強大的攻擊性和廣泛的地理分布而被認為是全球最具危害的植物病原體之一。煙草青枯病是由青枯菌引起的一種土傳性疾病，嚴重的影響了煙草的產(chǎn)量，開發(fā)有效的青枯病防治手段是學術研究和實際應用中的一項緊迫挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)上，采用作物輪作與嫁接和長期隔離等物理控制方法并不完全有效。銅基殺菌劑、鏈霉素化學農(nóng)藥的使用導致青枯菌產(chǎn)生耐藥性、化學殘留和生態(tài)系統(tǒng)破壞等問題。生防菌在田間條件下定植困難，其防治效果受到限制。噬菌體作為一種特異性靶向宿主的病毒，在植物病害防治方面具有巨大潛力。與細菌接種劑相比，噬菌體對根際微生物群落的影響較小，并且能夠在宿主存在的情況下快速繁殖并裂解致病菌。同時，相比致病菌對抗生素耐藥性的單向進化，噬菌體與宿主菌協(xié)同進化，動態(tài)阻控致病菌。通常認為噬菌體對人類和環(huán)境是安全的。美國Omnilytics的Agriphage、荷蘭FoA Safety的LISTEX Micreos EBI和美國Intralytix Inc.的ListShield等多種基于噬菌體的產(chǎn)品已獲得美國FDA和EPS的批準，用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、食品安全和環(huán)境保護。噬菌體在防控植物病害方面是有效的。一些研究報告稱，噬菌體在控制溫室和田間環(huán)境中病原體和植物病害的密度方面表現(xiàn)出出色的功效。一項研究顯示在溫室和田間條件下，不同噬菌體的組合使番茄病害的發(fā)病率降低了80％。
同時，噬菌體治療植物病害也面臨著巨大的挑戰(zhàn)。噬菌體的宿主特異性限制了其對青枯雷爾氏菌物種復合體(RSSC)的裂解范圍。因此，不斷挖掘具有廣泛裂解范圍和強抑制能力的噬菌體是應用于青枯病生物防治的一項重要工作。
綜上，噬菌體療法可作為一種安全有效的策略來防治植物青枯病。當前，優(yōu)質(zhì)噬菌體的篩選是這項策略極其重要的源頭性工作。
噬菌體LPRS20的一步生長曲線：
青枯雷爾氏菌LRS6在30℃下培養(yǎng)至A600＝0.43(9log CFU/mL)，500μL LRS6細菌懸浮液與500μL噬菌體液以最佳MOI＝0.001混合，30℃條件下，讓噬菌體吸附10分鐘。接下來將混合物以12,000rpm離心5分鐘，去除上清液，并用NB培養(yǎng)基洗滌沉淀兩次以去除未吸附的噬菌體。將沉淀重懸于30℃的10mL NB培養(yǎng)基中，并以200rpm的速度搖動。最后，前60分鐘每10分鐘測定一次噬菌體效價，60分鐘后每30分鐘通過雙層板測量噬菌體的滴度，總共240分鐘。噬菌體LPRS20的一步生長曲線測定結果如圖4所示，噬菌體LPRS20的潛伏期為40min，平均裂解量約為2450PFU/cell。裂解量＝穩(wěn)定期噬菌體效價/受感染的細胞的濃度。
噬菌體LPRS20復制能力強，當MOI＝0.001時，即可達到噬菌體的最大效價；噬菌體LPRS20的一步生長曲線顯示可達到2450PFU/cell的爆發(fā)量。
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