近年來，抗生素濫用已成為導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性增強及院內(nèi)感染率上升的主要因素，易導(dǎo)致耐藥性細(xì)菌感染的擴(kuò)散，并引發(fā)院內(nèi)感染?？股貫E用會加重重癥患者合并病原菌感染情況，延長患者的住院時間和增加患者的病死率。據(jù)統(tǒng)計，呼吸道感染中有20%～30%由細(xì)菌引起，常見的病原菌包括鮑曼不動桿菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌等。鮑曼不動桿菌是一種革蘭陰性條件致病菌，廣泛存在于自然環(huán)境、家庭、社區(qū)以及醫(yī)院中。鮑曼不動桿菌可引起肺部感染、腦膜炎、創(chuàng)傷感染及泌尿生殖系統(tǒng)感染等，危害免疫力弱、使用各種侵入性操作及長期使用廣譜抗生素治療的患者，可引發(fā)嚴(yán)重并發(fā)癥甚至危及生命。鮑曼不動桿菌由于具有較強的附著能力，已成為醫(yī)院感染中檢出率位列第四的病原體，并且對亞胺培南和美羅培南的耐藥率逐漸增高。實時監(jiān)控院內(nèi)感染病原菌的分布及其耐藥性對于有效預(yù)防和控制院內(nèi)感染至關(guān)重要。
芍藥苷作為芍藥的主要有效成分，具有顯著的抑菌作用?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，芍藥苷對多種細(xì)菌具有抑制作用，包括大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、金黃色葡萄球菌等。此外，芍藥苷還表現(xiàn)出對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、多重耐藥銅綠假單胞菌、耐碳青霉烯腸桿菌目細(xì)菌的抑制作用。目前關(guān)于芍藥苷對鮑曼不動桿菌抑制效果的研究較少。本研究旨在探索芍藥苷對鮑曼不動桿菌的抑菌機制，為開發(fā)新的抗感染劑提供參考。
1.材料與方法
1.1菌株
選擇2023年1月至2024年12月北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院呼吸科分離篩選出的編號為23091779的病原菌為研究對象，所選的菌株經(jīng)16S rRNA基因測序鑒定為鮑曼不動桿菌。所用16S rRNA基因通用引物為27F：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'，1492R：5'-TACCTTGTTACGACTT-3'。同時采用紙片擴(kuò)散法藥敏性試驗鑒定該菌株為多重耐藥鮑曼不動桿菌。
1.2試劑
芍藥苷（購自上海一研生物科技有限公司）；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（購自沈陽彥程生物制品有限公司）；肉湯培養(yǎng)基（購自青島海博生物技術(shù)有限公司）；二甲基亞砜（DMSO）（購自天津市富宇精細(xì)化工有限公司）。
1.3方法
1.3.1標(biāo)本采集與培養(yǎng)
采集呼吸科患者的痰液、灌洗液以及咽拭等，排除同一就診時期同一患者分離出的相同病原菌。將采集的標(biāo)本接種至固體培養(yǎng)基上，采用分區(qū)劃線方法分離培養(yǎng)純種病原菌，培養(yǎng)溫度為37℃，培養(yǎng)時間為18～24 h。
1.3.2菌株鑒定和藥敏試驗
通過芬蘭Bioscreen C全自動微生物生長曲線分析儀（對病原菌進(jìn)行鑒定。采用紙片擴(kuò)散法（K-B法）對病原菌進(jìn)行藥敏性試驗。質(zhì)控菌株為金黃色葡萄球菌ATCC 25923、大腸埃希菌ATCC 25922、銅綠假單胞菌ATCC 27853、鮑曼不動桿菌ATCC 19606。質(zhì)控菌株均購自國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗中心。
1.3.3菌株復(fù)蘇和培養(yǎng)
取?80℃凍存的編號為23091779的鮑曼不動桿菌試紙片，用無菌鑷子夾取試紙片置于5 mL肉湯培養(yǎng)基中，37℃，200 r/min搖床培養(yǎng)過夜；吸取100μL菌液加入營養(yǎng)瓊脂固體培養(yǎng)基上，用涂布棒均勻地將菌液涂滿整個平板，形成菌苔后進(jìn)行分區(qū)劃線直至分離培養(yǎng)出單菌落。
1.3.4藥液制備
將芍藥苷溶解于DMSO至質(zhì)量濃度為50 mg/mL制成母液，再用肉湯培養(yǎng)液稀釋母液至芍藥苷濃度為0.6 mg/mL備用。
1.3.5最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）的測定
采用二倍稀釋法測定芍藥苷對鮑曼不動桿菌的MIC和MBC。設(shè)計三個不同濃度致病菌測試組，即濃度為1×106 CFU/mL、1×107 CFU/mL、1×108 CFU/mL的鮑曼不動桿菌菌液。每個測試組中加入100μL鮑曼不動桿菌菌液至96孔板中，再加入100μL芍藥苷稀釋液（芍藥苷母液稀釋至原體積的2、4、8、16、32、64、128倍）；采用100μL 1∶128稀釋的芍藥苷藥液+100μL肉湯培養(yǎng)液作為空白對照；100μL肉湯培養(yǎng)液+100μL鮑曼不動桿菌菌懸液作為陰性對照。裝有混合菌液的96孔板置于37℃細(xì)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)后的菌液取100μL，采用平板活菌計數(shù)法計算無細(xì)菌生長的最低藥物濃度即MIC。將未長菌的培養(yǎng)液移種到營養(yǎng)瓊脂固體培養(yǎng)基上，當(dāng)生長出的菌落數(shù)量少于10 CFU即MBC。
相關(guān)新聞推薦
1、從實驗室到應(yīng)用：利用生長曲線分析儀篩選鼠李糖乳桿菌發(fā)酵的關(guān)鍵營養(yǎng)素?
3、照光對稻曲病菌菌絲生長的影響與調(diào)控機制（二）