生物表面活性劑是一類由微生物代謝產(chǎn)生的兩性化合物，具有化學(xué)合成表面活性劑所無法比擬的環(huán)境兼容性和廣闊的應(yīng)用前景。由于生物表面活性劑可生物降解、對(duì)有機(jī)體無毒害，因此在醫(yī)藥、洗滌劑、原油開采和食品工業(yè)以及植物病原菌生物防治方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。假單胞桿菌BS1是從大慶石油污染土樣中分離的一株可以產(chǎn)生生物表面活性劑的菌株，同時(shí)發(fā)現(xiàn)假單胞桿菌BS1的菌體、去菌體發(fā)酵濾液對(duì)植物病原菌有一定的抑制作用，這表明了假單胞桿菌BS1具有一定的生防潛力。由此可見，假單胞桿菌BS1具有很好的工業(yè)開發(fā)前景和應(yīng)用價(jià)值。將對(duì)假單胞桿菌BS1培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，為以后開發(fā)利用假單胞桿菌BS1提供了更加可靠的理論依據(jù)。
1材料與方法
1.1供試菌株
假單胞桿菌BS1，由黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)農(nóng)學(xué)院植物病理與應(yīng)用微生物所提供。
1.2供試培養(yǎng)基
無機(jī)鹽培養(yǎng)基：硝酸鈉1.5 g，硫酸銨1.5 g，磷酸氫二鉀1.31 g，硫酸鎂0.5 g，氯化鉀0.5 g，硫酸亞鐵0.01 g，氯化鈣0.002 g，蒸餾水1 000 mL，pH 7.0。
發(fā)酵培養(yǎng)基：硝酸鈉1.5 g，硫酸銨1.5 g，磷酸氫二鉀1.0 g，硫酸鎂0.5 g，氯化鉀0.5 g，硫酸亞鐵0.01 g，氯化鈣0.002 g，蒸餾水1 000 mL，液體石蠟5%，pH 7.0。
固體LB培養(yǎng)基：胰化蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，氯化鈉10 g，瓊脂15 g，定容至1 000 mL。以上培養(yǎng)基均經(jīng)過121℃高壓蒸汽滅菌20 min后，保存?zhèn)溆谩?
1.3碳源對(duì)假單胞桿菌BS1生長的影響
將供試假單胞桿菌BS1在固體LB培養(yǎng)基上活化24 h后，用無菌水配制成菌懸液（107cfu·mL-1）。向100 mL的無機(jī)鹽培養(yǎng)基中分別加入5 mL的液體石蠟、正己烷、正辛烷、正庚烷作為碳源，每處理重復(fù)3次，滅菌后，按1%的比例分別接種菌懸液，置于37℃、180 r·min-1振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)9 d，每隔24 h取一次樣，通過紫外分光光度計(jì)測(cè)定各處理菌懸液的光吸收值（OD640）。
1.4接種量對(duì)假單胞桿菌BS1生長的影響
在100 mL滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基中分別以1%、2%、3%、5%、7.5%、10%的比例接種菌懸液，每處理3次重復(fù)，置于37℃、180 r·min-1振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)9 d，每隔24 h取一次樣，通過紫外分光光度計(jì)測(cè)定各處理菌懸液的光吸收值（OD640），每處理重復(fù)3次。
1.5溫度對(duì)假單胞桿菌BS1生長的影響
將菌懸液按3%比例的接種量接種于滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基中，然后分別置于25、30、35、37、40℃，180 r·min-1的振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)9 d，每隔24 h取一次樣，每處理重復(fù)3次，通過紫外分光光度計(jì)測(cè)定各處理菌懸液的光吸收值（OD640）。
1.6 pH對(duì)假單胞桿菌BS1生長的影響
用0.1 mol·L-1的HCl或NaOH將發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值分別調(diào)至5.0、6.0、7.0、8.0和9.0，每處理3次重復(fù)，滅菌后按3%比例的接種量接入菌懸液，置于30℃、180 r·min-1振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)9 d，每隔24 h取樣一次，通過紫外分光光度計(jì)測(cè)定各處理菌懸液的光吸收值（OD640），每處理重復(fù)3次。
1.7 NaCl濃度對(duì)假單胞桿菌BS1生長的影響
在發(fā)酵培養(yǎng)基其他成分不變的情況下，分別以0%、1%、3%、5%、10%、15%的比例添加NaCl，每處理3次重復(fù)，然后按3%比例的接種量接入菌懸液，置于30℃、180 r·min-1振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)9 d，每隔24 h取一次樣，通過紫外分光光度計(jì)測(cè)定各處理菌懸液的光吸收值（OD640），每處理重復(fù)3次。
1.8裝液量對(duì)假單胞桿菌BS1生長的影響
將250 mL的三角瓶中分別裝入70、100、130、160、190 mL的發(fā)酵培養(yǎng)基，每處理3次重復(fù)，滅菌后，按3%比例的接種量接入菌懸液，置于30℃、180 r·min-1振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)9 d，每隔24 h取一次樣，通過紫外分光光度計(jì)測(cè)定各處理菌懸液的光吸收值（OD640），每處理重復(fù)3次。
1.9最適培養(yǎng)條件下假單胞桿菌BS1生長曲線的測(cè)定
將發(fā)酵培養(yǎng)基按130 mL的裝液量裝入三角瓶中（250 mL的三角瓶），滅菌后以3%比例的接種量接入菌懸液，置于30℃、180 r·min-1振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每處理重復(fù)3次，定時(shí)取樣，通過紫外分光光度計(jì)測(cè)定各處理菌懸液的光吸收值（OD640）。
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