本文旨在以海區(qū)具有代表性的優(yōu)勢海洋細菌濃度加富的方法，選用防污涂料中廣泛使用的防污劑和實驗室自制防污劑為受試化合物，以凝膠板模擬涂層進行室內(nèi)模擬淺海掛板，以探索基于海洋細菌生長曲線變化。
測定OD值并繪制OD-t生長曲線
取200μL各受試菌懸液于96孔板中，分別向各孔板中加入1μL不同濃度的防污劑，以加入1μL純?nèi)軇〥MSO的孔板作為對照，以添加對應(yīng)濃度防污劑的液體培養(yǎng)基作為空白，用酶標儀在600nm波長下測定其OD值(楊浩等，1996;喬軍等，2002;馬勇等，2011)。將96孔板置于25°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，期間每隔1—2 h測定并記錄菌懸液的OD值，繪制3種受試菌在不同條件板孔中的生長曲線，得到各種防污劑的最小抑制濃度MIC。
受試菌的生長曲線及MIC
3種受試菌在幾種不同濃度防污劑溶液影響下的生長曲線，可以很直觀地反應(yīng)出5種試驗防污劑的抑菌效果(Marionet al，2008)，見圖1、圖2、圖3、圖4、圖5。
由圖1—圖5可以看出，隨著防污劑CPT、TBTO和ZPT濃度的升高，3種受試菌的生長逐漸受到抑制，當溶液濃度達分別到0.97×10–3mg/mL、1.99×10–3mg/mL和1.91×10–3mg/mL時，三種防污劑對受試菌均表現(xiàn)出明顯的抑制作用。
圖1 CPT對三種受試菌生長曲線的影響
圖2 TBTO對三種受試菌生長曲線的影響
圖3 ZPT對三種受試菌生長曲線的影響
圖4 DCDMA對三種受試菌生長曲線的影響
圖5 Diuron對三種受試菌生長曲線的影響
對于CPT，整體來看，其抑菌性隨濃度增加而增加。但是，當濃度達到0.97×10–3mg/mL后，繼續(xù)增大濃度，抑菌效果僅有輕微增加;并且隨時間延長，受試菌呈平穩(wěn)生長狀態(tài);對于TBTO，在各個試驗濃度下，均表現(xiàn)出了很好的抑菌效果，且濃度變化對抑菌效果影響不大。但隨時間的延長，在17.5h時，受試菌生長速率明顯加快，這或許和細菌的生長周期有關(guān);對于ZPT，在濃度低于1.91×10–3mg/mL時，抑菌效果不是太明顯，當濃度達到1.91×10–3mg/mL時，才表現(xiàn)出明顯的抑菌性，繼續(xù)增大濃度對其影響不大。
由圖3可以看出，當溶液濃度達到8.46×10–3mg/mL時，DCDMA才對三種受試菌表現(xiàn)出輕微的抑制作用，但當濃度繼續(xù)增加時，抑菌效果并沒有增加，這可能是因為溶液中的DCDMA已達到飽和狀態(tài)。相較于前三種防污劑，DCDMA的防污效果并不十分顯著。
由圖5中3種受試菌的生長曲線可以看出，Diuron對海洋細菌的正常生長幾乎沒有影響，當濃度高達0.493mg/mL時，依然沒有明顯抑制作用。印證了前面室內(nèi)掛板的結(jié)果。
結(jié)果
測定OD-t生長曲線的方法，在殺菌劑的檢測中已經(jīng)得到應(yīng)用(孫世春等，1999;陳默等，2009)。此法在本研究中作為一種輔助方法，不但對防污劑的防污效果做出了定量的大小比較，而且對防污劑在實際防污涂料中的用量問題，給予一定的參考值。室內(nèi)短期掛板實驗，采用幾種菌在海水中混合培養(yǎng)的人工加富濃度模式，與實海(淺海掛板)情況更接近，比測試單一某種菌種的抑菌性更具實際意義，且其24h抑菌率與OD-t生長曲線法所得結(jié)果一致。因此，本研究方法對于海洋防污劑的評價具有可靠性。
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