芽孢桿菌在動(dòng)物上應(yīng)用主要依賴其在腸道或環(huán)境中繁殖分泌消化酶、維生素或抗菌物質(zhì)而達(dá)到益生的功能。同一菌株在不同生長(zhǎng)環(huán)境中繁殖和分泌產(chǎn)物能力有很大差異，不同菌株之間的生長(zhǎng)潛力和分泌產(chǎn)物類別同樣有較大差異。本文主要探究枯草與解淀粉芽孢桿菌的生理生化指標(biāo)差異，及枯草、地衣與解淀粉芽孢桿菌低溫生長(zhǎng)和平板上的產(chǎn)酶比較，以期探尋三類芽孢之間性能差異的規(guī)律，為其在動(dòng)物養(yǎng)殖中的應(yīng)用方案提供菌株性能基礎(chǔ)數(shù)據(jù)指導(dǎo)。
從-80℃冰箱取出保種甘油管，用接種環(huán)挑取一環(huán)菌液，采用劃線法接種到營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)至出現(xiàn)單菌落。從平板上挑取一環(huán)菌苔，接種到盛有100 mL LB液體培養(yǎng)基中，37℃、200 r/min振蕩培養(yǎng)12 h，作為種子。
將種子液按3%接種量接種到盛有100 mL LB液體培養(yǎng)基中，15℃或28℃、200 r/min連續(xù)培養(yǎng)24～80 h，每隔4～8 h在超凈工作臺(tái)進(jìn)行取樣，采用分光光度計(jì)測(cè)定600 nm處吸光值，如菌液過濃，用純凈水進(jìn)行適當(dāng)稀釋，吸光值控制在0.3～0.6，用相應(yīng)稀釋倍數(shù)的LB培養(yǎng)基作為對(duì)照。以培養(yǎng)時(shí)間t為橫坐標(biāo)，吸光值OD600為縱坐標(biāo)，制作生長(zhǎng)曲線圖。
酪素培養(yǎng)基：干酪素10 g，酵母膏1 g，瓊脂20 g，用1 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH為7.0，用蒸餾水定容至1 L，121℃滅菌30 min。
淀粉培養(yǎng)基：可溶性淀粉2 g，蛋白胨10 g，牛肉膏5 g，氯化鈉5 g，瓊脂20 g，用1 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH為7.2，用蒸餾水定容至1 L，121℃滅菌30 min。
染色液酸性汞試劑：HgCl215 g，濃HCl 20 mL，加蒸餾水至100 mL。
盧哥氏碘液：碘片1 g，碘化鉀2 g。先將碘化鉀溶解在少量水中，再將碘片溶解在碘化鉀中，待碘全溶后，加蒸餾水至300 mL。
生長(zhǎng)曲線繪制
15℃生長(zhǎng)曲線試驗(yàn)測(cè)定了芽孢桿菌在低溫（15℃）下生長(zhǎng)情況，每隔8 h取樣測(cè)定吸光值，共培養(yǎng)80 h。試驗(yàn)表明，兩株解淀粉芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌1號(hào)在低溫條件下生長(zhǎng)好于其余兩株枯草和地衣芽孢桿菌。隨著時(shí)間延長(zhǎng)，枯草芽孢桿菌1號(hào)的生物量最大，在72 h OD600達(dá)到8.0，兩株解淀粉芽孢桿菌最高OD600也出現(xiàn)在48 h以后，最高值為3.8～4.4。枯草芽孢桿菌2號(hào)和3號(hào)在15℃下生長(zhǎng)情況較差，48 h后才進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，而兩株地衣芽孢桿菌生物量80 h內(nèi)一直低于1.0。綜上，試驗(yàn)中兩株解淀粉芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌1號(hào)相較于其他四株芽孢桿菌更能耐受低溫，較適宜在低溫水產(chǎn)養(yǎng)殖水體應(yīng)用（圖1和圖2）。
圖1枯草芽孢桿菌15℃生長(zhǎng)曲線
圖2地衣和解淀粉芽孢桿菌15℃生長(zhǎng)曲線
28℃生長(zhǎng)曲線芽孢桿菌在28℃下生長(zhǎng)較為迅速，所評(píng)估的7株芽孢桿菌都在4 h內(nèi)進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，24 h即可到達(dá)穩(wěn)定期，生長(zhǎng)明顯快于低溫下。但研究表明，枯草芽孢桿菌和解淀粉芽孢桿菌28℃下最高OD600值均低于15℃，因此，同一株菌28℃時(shí)最高生物量不一定高于15℃。地衣芽孢桿菌在低溫下生長(zhǎng)最差的狀態(tài)，在28℃下長(zhǎng)勢(shì)甚至好于解淀粉芽孢桿菌和部分枯草芽孢桿菌（圖3和圖4）。
圖3枯草芽孢桿菌28℃生長(zhǎng)曲線
圖4地衣和解淀粉芽孢桿菌28℃生長(zhǎng)曲線
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