目的：通過(guò)使用三氧化二砷（As2O3）誘導(dǎo)雌激素受體（estrogen receptor，ER）的再次表達(dá)，通過(guò)對(duì)乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的研究來(lái)探討ER在陰性乳腺發(fā)展過(guò)程中的作用。方法：本研究以ER陰性的人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231為研究對(duì)象，采用免疫組化、生長(zhǎng)曲線檢測(cè)法等生物學(xué)方法來(lái)檢測(cè)ER在陰性乳腺癌發(fā)展過(guò)程中的作用。結(jié)果：以MCF-7作為陽(yáng)性對(duì)照，免疫組化結(jié)果顯示，As2O3可以誘導(dǎo)ER的再次產(chǎn)生。進(jìn)一步觀測(cè)MDA-MB-231細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線，發(fā)現(xiàn)ER可明顯抑制其生長(zhǎng)，與對(duì)照組相比，有顯著性差異（P<0.05）。結(jié)論：ER的再表達(dá)可抑制陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的生長(zhǎng)。
實(shí)驗(yàn)步驟
免疫組化：（1）細(xì)胞爬片。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)消化制成單細(xì)胞懸液，加入到預(yù)先已經(jīng)放置蓋玻片的24孔板中，每孔加入預(yù)先計(jì)算的細(xì)胞懸液量，放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)24h后，取出蓋玻片，PBS洗干凈，風(fēng)干。冷丙酮固定10min.（2）加入3%HZOZ適量，37℃，30min，以用來(lái)清除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的影響；洗干凈；山羊血清封閉；加入ER抗體，過(guò)夜；洗干凈，加辣根酶標(biāo)記的鏈霉卵白素，37℃，30min，洗干凈；DAB顯色，顯微鏡下觀察；自來(lái)熟洗滌，蘇木素染色，沖洗反藍(lán)；酒精脫水，二甲苯透明，封片。用PBS代替一抗制成陰性對(duì)照。MCF-7作為陽(yáng)性對(duì)照。
Westem Blot實(shí)驗(yàn)：（1）提取細(xì)胞的總蛋白。收集經(jīng)過(guò)不同處理的盡量多的細(xì)胞，預(yù)冷的1×PBS洗3次，800g，離心5min/每次。棄上清，加入細(xì)胞裂解液適量，置于冰上裂解10min，每隔2min吹打一次，800g，離心5min。（2）吸取上清利用己準(zhǔn)備好的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出濃度并進(jìn)行WB實(shí)驗(yàn)。
生長(zhǎng)曲線實(shí)驗(yàn)：將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MDA-MB-231細(xì)胞調(diào)整細(xì)胞濃度為5×105/mL，換含As2O3的培養(yǎng)液，至As2O3終濃度分別為5.0μmol/L，連續(xù)培養(yǎng)48h。采用電子監(jiān)控技術(shù)監(jiān)測(cè)其生長(zhǎng)變化。
ER對(duì)MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞株生長(zhǎng)曲線的影響。
實(shí)驗(yàn)分為兩組（contrl組，即未經(jīng)As2O3處理；實(shí)驗(yàn)組，經(jīng)As2O3處理），采用電子檢測(cè)探究ER對(duì)MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞株生長(zhǎng)曲線的影響。結(jié)果如圖3所示，處理后細(xì)胞生長(zhǎng)曲線變得平緩，細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制，提示我們或許ER抑制了MDA-MB-231細(xì)胞的生長(zhǎng)。
生長(zhǎng)曲線結(jié)果提示我們ER可抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，這或許可以為臨床治療ER陰性患者提供一定的思路。
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